甲状腺刺激ホルモン、17のアルファヒドロキシプロゲステロン、免疫反応性トリプシン、および乾燥血液スポットのクレアチンキナーゼMMイソエ酵素の四重層 - 蛍光免疫測定の同時

甲状腺刺激ホルモン（TSH）、17個のアルファヒドロキシプロゲステロン（17アルファ-OHP）、免疫反応性トリプシン（IRT）、およびCreatine Kinase MM（CKMM）の4つの分析物を同時に測定するための四重層ラベル蛍光免疫アッセイについて説明します。アッセイは、4つの異なるランタニドイオン（Eu3+、Tb3+、Sm3+、およびDy3+）で標識された免疫剤、共蛍光の原理を適用した解離性蛍光増強、および時間分解蛍光測定に基づいています。モノクローナル抗アルファ-TSHおよび抗ART抗体およびポリクローナル抗CK-MM抗体を、それぞれEU3+、SM3+、およびDY3+で標識しました。17 Alpha-OHPにTB3+でラベル付けされました。アッセイは、ベータ-TSH、IRT、およびCK-MMに対するモノクローナル抗体の混合物でコーティングされた微小誘合成ストリップウェルで行われ、ウサギ抗17アルファ-OHP抗体を捕獲するためにポリクローナルヤギ抗ウサギIgGを実施しました。免疫反応が完了した後、ランタニドの結合画分を共蛍光増強溶液に解離し、高度に蛍光キレートを生成しました。4つのランタニド特異的信号は、その後、時間分解蛍光計で測定されました。アッセイの検出限界は、TSHで0.1 MIU/L、17アルファOHPで2 nmol/L、IRTで2マイクログラム/L、CK-MMで4 U/Lでした。

We describe a quadruple-label fluorometric immunoassay for simultaneously measuring four analytes: thyroid-stimulating hormone (TSH), 17 alpha-hydroxyprogesterone (17 alpha-OHP), immunoreactive trypsin (IRT), and creatine kinase MM (CK-MM). The assay is based on immunoreagents labeled with four different lanthanide ions (Eu3+, Tb3+, Sm3+, and Dy3+), on dissociative fluorescence enhancement applying the principle of co-fluorescence, and on time-resolved fluorometry. The monoclonal anti-alpha-TSH and anti-IRT antibodies and the polyclonal anti-CK-MM antibody were labeled with Eu3+, Sm3+, and Dy3+, respectively; 17 alpha-OHP was labeled with Tb3+. The assay was performed in microtitration strip wells coated with a mixture of monoclonal antibodies against beta-TSH, IRT, and CK-MM and a polyclonal goat anti-rabbit IgG for capture of the rabbit anti-17 alpha-OHP antibodies. After completion of the immunoreactions, the bound fractions of the lanthanides were dissociated into the co-fluorescence enhancement solution, creating highly fluorescent chelates. The four lanthanide-specific signals were subsequently measured in a time-resolved fluorometer. The detection limits of the assay were 0.1 mIU/L for TSH, 2 nmol/L for 17 alpha-OHP, 2 micrograms/L for IRT, and 4 U/L for CK-MM.