APO A-I CNBRフラグメントのLCAT活性化特性と球形錯体の球状粒子への変換

APO A-I、APO A-I-CNBRフラグメント、APO A-IIおよびAPO A-IVで生成されたリン脂質コレステロール - アポリポタンパク質複合体の基質特性を研究しました。基質として異なる複合体で決定された速度論的パラメーターは、APO A-IおよびAPO A-IVを含む複合体がAPO A-Iフラグメントで生成された複合体よりも約40倍効率的であることを示しました。このシステムでは、APO A-IIを含む基質の効率が最も低かった。さまざまなアポリポタンパク質脂質複合体で観察された運動パラメーターの違いにもかかわらず、複合体に挿入されたコレステロールは、調査したすべてのシステムで24時間後に90％以上エステル化されました。速度論的実験の結果に基づいて、コレステロールの外部源としての低密度リポタンパク質の存在下で、コレステリルエステルコアの形成により、椎間板錯体の球状粒子への変換に従いました。LCATとLCATと24時間インキュベートした後、電子顕微鏡による球状粒子の形成を観察しました。変換された粒子のコレステリルエステルの平均割合は、総コレステロールの約60％であり、APO A-I-CNBR-1-DPPC-コレステロール複合体で40％、APO A-I-DPPC-コレステロール複合体では最大86％変化しました。。複合体中のタンパク質の二次構造は有意に修正されていませんでした。しかし、リン脂質が球体の表面の単分子層で組織されているため、リン脂質アシル鎖の平行方向とともに、リン脂質アシル鎖の平行方向とともに、リン脂質相転移は消失しました。

We studied the substrate properties of the phospholipid-cholesterol-apolipoprotein complexes generated with apo A-I, apo A-I-CNBr fragments, apo A-II and apo A-IV for cholesterol esterification by the enzyme lecithin-cholesterol acyltransferase (LCAT). The kinetic parameters determined with the different complexes as substrates, showed that the complexes containing apo A-I and apo A-IV were about 40-times more efficient than those generated with the apo A-I fragments. In this system, the substrates containing apo A-II had the lowest efficiency. In spite of the differences in the kinetic parameters observed with the various apolipoprotein-lipid complexes, the cholesterol inserted in the complexes was esterified for more than 90% after 24 h in all systems studied. Based upon the results of the kinetic experiments, we followed the transformation of the discoidal complexes into spherical particles, due to the formation of a cholesteryl esters core, in the presence of low-density lipoproteins as an external source of cholesterol. We observed the formation of spherical particles by electron microscopy, after incubation of the discoidal complexes with LCAT for 24 h. The average percentage of cholesteryl esters in the converted particles was around 60% of the total cholesterol, varying between 40% for the apo A-I-CNBr-1-DPPC-cholesterol complex and up to 86% for the apo A-I-DPPC-cholesterol complex. The secondary structure of protein in the complexes was not significantly modified. However, the phospholipid phase transition disappeared, together with the parallel orientation of the phospholipid acyl chains with the helical segments of the apolipoproteins, as the phospholipids are organized in a monolayer at the surface of the spheres.