抗体結合ベンジル-EDTAの生体内分布と代謝に対するペプチドリンカーの影響in vitroおよびin vivoでの酵素消化の比較

放射性標識抗体の代謝に対する洞察は、より良い放射性採取および治療剤の設計に重要です。in vivoで切断できるリンカーの効果をテストするために、抗体LYM-1と111インチの標識ベンジル-EDTAの間にALA-LEU-ALA-LEUを導入しました。比較のために、リンカーなしで共役を研究しました。in vitroでの2つのコンジュゲートの消化により、Ala-Leu-Ala-Leuのあるコンジュゲートは、肝臓プロテアーゼカテプシンB1によって急速に切断されたことが示されました（T1/2約6時間）。100時間の消化後、ALA-LEU-ALA-LEU共役の逆相HPLC生成物分析により、総放射能の48％が（P-アミノベンジル）-EDTA（IN）と同じ保持時間、37％が同じ保持時間を持っていることが示されました。総放射能のうち、[p-（ala-leu-amido）ベンジル] -edta（in）と同じ保持時間がありました。97時間の消化後、リンカーのないコンジュゲートは、タンパク質にまだ放射能活性の79％を持っていました。また、マウスの2つのコンジュゲートをテストしました。Ala-Leu-Ala-Leuは、in vivoでの全身と肝臓のクリアランスに中程度の影響しかありませんでした。放射能の排泄は、リンカーで1日あたり約6％、リンカーなしで1日あたり約3％でした。単一のマウスの尿のHPLC分析は、in vitro研究と同様の産物を示しました。排泄された放射能の54％は（p-アミノベンジル）-EDTA（in）と同じ保持時間を持ち、10％は[P-（Ala-leu-amido）ベンジル] -EDTA（in）の保持時間を持っていました。

Insight into the metabolism of radiolabeled antibodies is important for the design of better radioimaging and therapy agents. To test the effect of linkers that can be cleaved in vivo, we introduced Ala-Leu-Ala-Leu between the antibody Lym-1 and an 111In-labeled benzyl-EDTA. For comparison, we studied a conjugate without the linker. Digestion of the two conjugates in vitro showed that the one with Ala-Leu-Ala-Leu was cleaved rapidly by the liver protease cathepsin B1 (T1/2 approximately 6 h). After 100 h of digestion, reversed-phase HPLC product analysis of the Ala-Leu-Ala-Leu conjugate showed that 48% of the total radioactivity had the same retention time as (p-aminobenzyl)-EDTA(In), and 37% of the total radioactivity had the same retention time as [p-(Ala-Leu-amido)benzyl]-EDTA(In). After 97 h of digestion, the conjugate without the linker had 79% of the radioactivity activity still attached to the protein. We also tested the two conjugates in mice. Ala-Leu-Ala-Leu had only a moderate effect on the whole body and liver clearance in vivo. The excretion of the radioactivity was about 6% per day with the linker and about 3% per day without the linker. HPLC analysis of the urine of a single mouse showed products similar to the in vitro study; 54% of the excreted radioactivity had the same retention time as (p-aminobenzyl)-EDTA(In), while 10% had the retention time of [p-(Ala-Leu-amido)benzyl]-EDTA(In).