同じホモジネートから無傷のミトコンドリアと核を分離する方法、および細胞核の特性に対するミトコンドリア破壊の影響

1.軟部組織のための改善されたグラウンドガラスホモジナイザーが記載されており、ミトコンドリアにかなりの損傷を引き起こすことなく、核の細胞破壊と解放を高度にもたらします。ミトコンドリアの分離に関する新しいホモジナイザーの優しさと有効性は、以前のタイプのホモジナイザーと同じ条件下で分離されたミトコンドリアのものを使用してpH調整なしで0.25 mスクロース溶液で分離されたミトコンドリアのATP ASE活性を比較することによって確認されています。新しいホモジナイザーの助けを借りて。これらの実験では、均質化のわずかに有害な効果を容易に明らかにするために、ミトコンドリアをかなり敏感な状態に維持するために、pH調整なしの0.25モル濃度のスクロースが使用されています。2.同じホモジネートからの形態学的に無傷のミトコンドリアと細胞核の分離のための新しい方法が説明されています。この手順では、0.44 mスクロースのホモジネートのpHは、均質化中にクエン酸とともに6.0-6.2に維持されます。腫瘍細胞からの核の分離のために、0.44 Mスクロースと0.005 m CACL（2）を使用する代替方法が投与されます。ただし、後者の方法では、変更されていないミトコンドリアは生成されません。3.この論文で説明されているように、非常に希薄なクエン酸でpH 6.0-6.2に調整された0.44 Mスクロースで分離された「無傷の」ミトコンドリアのアルファケトグルタル酸、マロン酸、コハク酸塩、およびヘキサン酸オキサイダーゼは調査されており、示されています。ミトコンドリアは、前述の方法によって0.25 mスクロースで分離されたものと好意的に比較されます。4.ミトコンドリアには、核が希釈アルカリでゲルを形成する能力を失う酵素が含まれていることがわかっています。この酵素は、後者が破壊されるとミトコンドリアから放出されます。5.新しい方法によって分離された核の一部の特性について簡単に説明しました。

1. An improved type of ground glass homogenizer for soft tissues has been described which brings about a high degree of cell disruption and liberation of nuclei without causing appreciable damage to mitochondria. The gentleness and effectiveness of the new homogenizer in respect to isolation of mitochondria have been ascertained by comparing the ATP-ase activities of mitochondria isolated in 0.25 M sucrose solution without pH adjustment using a previous type of homogenizer with those of mitochondria isolated under the same conditions with the aid of the new homogenizer. In these experiments sucrose of 0.25 molarity without pH adjustment has been used in order to maintain the mitochondria in a rather sensitive state so as to make slightly deleterious effects of homogenization readily apparent. 2. A new method is described for the isolation of morphologically intact mitochondria and cell nuclei from the same homogenate. In this procedure the pH of the homogenate in 0.44 M sucrose is maintained at 6.0-6.2 with citric acid during the homogenization. An alternative method employing 0.44 M sucrose plus 0.005 M CaCl(2) is given for the isolation of nuclei from tumor cells. However, the latter method does not produce unaltered mitochondria. 3. The alpha-ketoglutarate, malate, succinate, and hexanoate oxidases of the "intact" mitochondria isolated in 0.44 M sucrose adjusted to pH 6.0-6.2 with very dilute citric acid as described in this paper have been investigated, and it has been shown that the mitochondria compare favorably to those isolated in 0.25 M sucrose by a previously described method. 4. Mitochondria have been found to contain an enzyme which causes nuclei to lose their ability to form gels in dilute alkali. This enzyme is released from the mitochondria when the latter are disrupted. 5. Some properties of nuclei isolated by the new method have been briefly discussed.