アカゲザルマカクの長期再播種細胞の形質導入のためのRD114-プロデュータイプと角底部と型と型のレトロウイルスベクターの直接比較

最近、RD114（ネコ内因性レトロウイルスエンベロープタンパク質） - 型シュードタイプのレトロウイルス粒子は、ヒトのうなずき/SCID再可動細胞を効率的に伝達することが示されています。この研究では、RD114と型のベクターと再体制細胞の直接形質導入を、アカゲザルマカクモデルの標準的な角底体ベクターと比較しました。G-CSF/SCF変化CD34（+）アカゲザル末梢血細胞は、レトロネクチンでコーティングされたフラスコ上のSCF、FLT-3リガンド、およびMGDFの存在下で培養されました。2つの偽型が原始細胞を伝達する能力を直接評価するために、両方のベクトルを24時間ごとに標的細胞に同時に加え、96時間で合計4つの曝露しました。動物が1000 cgyの総体照射を受けた後、細胞は再灌流されました。形質導入の終わりに、CFUの遺伝子マーキング効率は、両星型LNL6ベクター（平均88.4％）対RD114-G1NAベクター（平均18.5％）で高かった。3匹の動物の長期生着後、総NEO遺伝子マークレベルはPBMNCで4〜5％、顆粒球で1.5〜4％でした。RD114-G1NAマーキングレベルは、単核細胞よりも顆粒球の方が一貫して高かったのに対し、両因子性LNL6マーキングレベルは顆粒球よりもPBMNCの方が高かった。微分遺伝子マーキングパターンは、RD114および角心的ベクトルが異なる前駆細胞または幹細胞集団を標的とする可能性があることを示唆しています。全体的な長期マーキングレベルの観点から、この予測前臨床モデルでは、RD114と型のベクターに明確な利点はありませんでした。ただし、M.O.I。または、受容体を誘導すると、この新しいベクターシステムで結果が改善される可能性があります。

Recently, RD114 (feline endogenous retrovirus envelope protein)-pseudotyped retroviral particles have been shown to transduce human NOD/SCID repopulating cells efficiently. In this study, we compared directly transduction of repopulating cells with RD114-pseudotyped vector to that with standard amphotropic vector in the rhesus macaque model. G-CSF/SCF-mobilized CD34(+) rhesus peripheral blood cells were cultured in the presence of SCF, Flt-3 ligand, and MGDF on Retronectin-coated flasks. To assess directly the ability of the two pseudotypes to transduce primitive cells, both vectors were added simultaneously to the target cells every 24 h, for a total of four exposures in 96 h. The cells were reinfused after the animals received 1000 cGy total body irradiation. At the end of transduction, gene marking efficiency of CFU was higher with amphotropic LNL6 vector (mean 88.4%) vs RD114-G1Na vector (mean 18.5%). After long-term engraftment in three animals, total neo gene marking levels were 4-5% in PBMNCs and 1.5-4% in granulocytes. The RD114-G1Na marking levels were consistently higher in granulocytes than in mononuclear cells, while amphotropic LNL6 marking levels were higher in PBMNCs than in granulocytes. The differential gene marking patterns suggest that RD114 and amphotropic vectors may target distinct progenitor or stem cell populations. There was no clear advantage for RD114-pseudotyped vectors in this predictive preclinical model in terms of overall long-term marking levels; however, optimization of transduction conditions by increasing m.o.i. or inducing the receptor could potentially improve results with this novel vector system.