ヒト皮膚細胞におけるトリプトファンヒドロキシラーゼ発現

主要な生合成酵素トリプトファンヒドロキシラーゼ（TPH）を評価する皮膚セロトニン作動性およびメラトニン作動性経路をさらに特徴付けることを試みました。全体のヒト皮膚、培養メラニン細胞およびメラノーマ細胞、皮膚線維芽細胞、扁平上皮癌細胞および角化細胞におけるTPH mRNAの幅広い発現がありました。遺伝子発現は、ウエスタンブロッティングによるTPH免疫反応種の検出と関連していた。2つの異なる抗体で行われたTPH免疫反応性種の特性評価は、予想されるタンパク質（55-60 kDa）と、より高い分子量と低い分子量の型の発現を示しました。推定された分解産物を含むこの幅広いTPH発現のパターンは、乳細胞腫細胞で以前に報告されたように、酵素の急速な転換を示唆しています。皮膚抽出物のRP-HPLCは、セロトニンとN-アセチルセロトニンの保持時間を持つ蛍光種を示しました。皮膚生検で行われた免疫細胞化学は、正常および悪性メラニン細胞に対するTPH免疫反応性を局在化しました。TPH mRNAとタンパク質は培養正常および病理学的表皮および皮膚皮膚細胞で広く発現しているが、in vivo TPH発現はメラニン細胞起源の細胞に主に制限されていると結論付けています。

We attempted to further characterize cutaneous serotoninergic and melatoninergic pathways evaluating the key biosynthetic enzyme tryptophan hydroxylase (TPH). There was wide expression of TPH mRNA in whole human skin, cultured melanocytes and melanoma cells, dermal fibroblasts, squamous cell carcinoma cells and keratinocytes. Gene expression was associated with detection of TPH immunoreactive species by Western blotting. Characterization of the TPH immunoreactive species performed with two different antibodies showed expression of the expected protein (55-60 kDa), and of forms with higher and lower molecular weights. This pattern of broad spectrum of TPH expression including presumed degradation products suggests rapid turnover of the enzyme, as previously reported in mastocytoma cells. RP-HPLC of skin extracts showed fluorescent species with the retention time of serotonin and N-acetylserotonin. Immunocytochemistry performed in skin biopsies localized TPH immunoreactivity to normal and malignant melanocytes. We conclude that while the TPH mRNA and protein are widely expressed in cultured normal and pathological epidermal and dermal skin cells, in vivo TPH expression is predominantly restricted to cells of melanocytic origin.