光反応性物質P類似体の同位体およびアフィニティタグは、MALDI-TOF分析によってNK-1受容体内の共有結合を識別する

物質Pの光反応性類似体（ビオチンスルホンスペーサー（アミノペンタンティックまたはGly（3）） - arg-pro-lys-pro-（pbzl）phe-gln-phe-phe-gly-leu-met（o（2））nh（2））は、イソトープ（deuterium）を使用しています。重水素は、（d） - ビオチンまたはエピビオチンスルホン（d（3））、グライ（3）スペーサーリンカー（d（6））、またはsp（d（2））の位置9のグライに存在していました。したがって、ペプチド類似体は、ラベル付けされていないか、トリ、ペンタ、または六十年度のいずれかである可能性があります。これらのペプチド類似体の使用で得られた結果は、（d） - ビオチンスルホンとエピビオチンスルホンがストレプトアビジンによって同じ親和性で認識されていないことを示しています。位置5の非依存性および脂肪指向性物質P（SP）類似体の1：1モル比を伴うヒトNK-1受容体の光標識、続いて消化、精製、およびMALDI-TOF質量分析分析が続くと、SPアナイシブの容易に関連する受容体のドメインの識別が容易になりました。実際、質量スペクトルのダブレットは共有結合複合体に特異的でしたが、単一のピークは汚染種に起因する可能性があります。この方法は、高度に疎水性Gタンパク質の結合受容体の場合のように、微小量の複合体を分析する必要がある場合に特に適しています。

Photoreactive analogues of substance P (biotin sulfone-spacer (amino pentanoic or Gly(3))-Arg-Pro-Lys-Pro-(pBzl)Phe-Gln-Phe-Phe-Gly-Leu-Met(O(2))NH(2)) with or without isotope (deuterium) labeling have been synthesized. Deuteriums were present on (d)-biotin or epibiotin sulfone (D(3)), on the Gly(3) spacer linker (D(6)), or on the Gly in position 9 of SP (D(2)). Therefore, peptide analogues could be either unlabeled or tri-, penta-, or hexadeuterated. Results obtained with the use of these peptide analogues show that (d)-biotin sulfone and epibiotin sulfone are not recognized with the same affinity by streptavidin, with (d)-biotin sulfone displaying better affinity for the protein. Photolabeling of the human NK-1 receptor with a 1:1 molar ratio of nondeuterated and deuterated photoreactive substance P (SP) analogues in position 5, followed by combined digestions, purification, and MALDI-TOF mass spectrometry analysis, made the identification of the domain of the receptor covalently linked by the photoreactive SP analogue easier. Indeed, doublets in mass spectra were specific for the covalent complex whereas single peaks could be attributed to contaminating species. This method is particularly suitable when minute amounts of complex have to be analyzed, as in the case of highly hydrophobic G-protein coupled receptors.