サイクリンEの発現は、網膜芽細胞腫腫瘍抑制タンパク質の不活性化、E2Fの活性化、およびG1-S相の進行のためにサイクリンD-CDK4を分散させる可能性があります。

後期G1相におけるCDK2-シクリンEの活性化は、細胞周期の網膜芽細胞腫タンパク質（PRB）の不活性化とG1-S相の進行において重要な役割を果たすことが示されています。ホスファチジルイノシトール3-OH-キナーゼ阻害剤LY294002は、サイクリンD1の蓄積、CDK4活性、したがってα-トロンビン刺激IIC9細胞（中国のハムスター胚芽球芽球）におけるG1進行をブロックすることが示されています。私たちの以前の結果は、サイクリンEの発現がLY294002で処理されたα-トロンビン刺激IIC9細胞におけるS期の進行を救助し、サイクリンEがG1進行に不可欠なCDK4活性を提供すると主張していることを示しています。この作業では、以前のCDK4-シクリンD1活性がない場合にPRBを不活性化するアルファ - トロンビン誘発CDK2-シクリンE活性の能力を調査します。Cdk4-Cyclin D1活性がない場合、CDK2-シクリンEは、少なくとも1つの残基でin vivoでPRBをリン酸化し、E2F応答要素へのPRB結合を廃止することを報告します。また、サイクリンEの発現はE2Fの活性化を救い、サイクリンがサイクリンDキナーゼ阻害されたα-トロンビン刺激細胞の発現を救助します。さらに、E2F活性の救助、サイクリンA発現、およびEの発現によるDNA合成は、PRBの構成的に活性な変異体であるCDK2（D145N）またはRbdeltacdkの発現によってブロックされます。ただし、4つの既知のサイクリンE-CDK2リン酸化部位をRBDELTACDKに復元すると、E2F活性化、サイクリンA発現、およびS相の進行によってアッセイされるように、G1後期の不活性化の影響を受けやすくなります。これらのデータは、以前のCdk4-サイクリンD活性を持たないCdk2-シクリンEが、PRBをリン酸化および不活性化し、E2Fを活性化し、DNA合成を誘導できることを示しています。

The activation of CDK2-cyclin E in late G1 phase has been shown to play a critical role in retinoblastoma protein (pRb) inactivation and G1-S phase progression of the cell cycle. The phosphatidylinositol 3-OH-kinase inhibitor LY294002 has been shown to block cyclin D1 accumulation, CDK4 activity and, thus, G1 progression in alpha-thrombin-stimulated IIC9 cells (Chinese hamster embryonic fibroblasts). Our previous results show that expression of cyclin E rescues S phase progression in alpha-thrombin-stimulated IIC9 cells treated with LY294002, arguing that cyclin E renders CDK4 activity dispensable for G1 progression. In this work we investigate the ability of alpha-thrombin-induced CDK2-cyclin E activity to inactivate pRb in the absence of prior CDK4-cyclin D1 activity. We report that in the absence of CDK4-cyclin D1 activity, CDK2-cyclin E phosphorylates pRb in vivo on at least one residue and abolishes pRb binding to E2F response elements. We also find that expression of cyclin E rescues E2F activation and cyclin A expression in cyclin D kinase-inhibited, alpha-thrombin-stimulated cells. Furthermore, the rescue of E2F activity, cyclin A expression, and DNA synthesis by expression of E can be blocked by the expression of either CDK2(D145N) or RbDeltaCDK, a constitutively active mutant of pRb. However, restoring four known cyclin E-CDK2 phosphorylation sites to RbDeltaCDK renders it susceptible to inactivation in late G1, as assayed by E2F activation, cyclin A expression, and S phase progression. These data indicate that CDK2-cyclin E, without prior CDK4-cyclin D activity, can phosphorylate and inactivate pRb, activate E2F, and induce DNA synthesis.