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Alphaherpesvirinaeのメンバーである感染性喉頭喉頭炎ウイルス(ILTV)は、いくつかのユニークな遺伝子を持っています。それらの1つであるUL0は、ILTV感染細胞の核に蓄積する豊富に発現したタンパク質をコードします。この研究は、このタンパク質がin vitroウイルスの複製に不可欠であり、UL0欠失変異体が培養細胞でわずかな成長欠陥のみを示すことを示しています。ILTVのUL0遺伝子遺伝子座は、ヒトサイトメガロウイルスの即時病原体プロモーターの制御下で、高病原性鳥インフルエンザウイルスの強化GFPまたはヘマグルチニン(HA)、サブタイプH7をコードする外来DNA配列の挿入にも使用されました。外来タンパク質の発現は、(免疫)蛍光テストとウエスタンブロット分析によって示されました。鶏の実験的感染後、UL0欠失変異体は、親の野生型ILTVとUL0救助変異体の両方に比べて減衰することが判明しました。それにもかかわらず、UL0陰性ILTVで免疫したすべての動物は、その後の毒性ILTVに感染した後、臨床疾患から保護されました。さらに、HAを発現するILTVで免疫したすべての動物は、H7サブタイプの鳥インフルエンザウイルスを最小限の臨床徴候で致命的な挑戦を生き延びました。したがって、UL0陰性およびHA発現ILTV組換えは、ILTおよびFOWLペストに対する二価の生体ウイルスワクチンとして使用できます。不活性化インフルエンザウイルスワクチンとは異なり、HAを発現するILTV組換えは質量適用に適しているはずであり、フィールド内のワクチン接種とウイルスに感染した動物の間の血清学的差別も許可する必要があります。
Alphaherpesvirinaeのメンバーである感染性喉頭喉頭炎ウイルス(ILTV)は、いくつかのユニークな遺伝子を持っています。それらの1つであるUL0は、ILTV感染細胞の核に蓄積する豊富に発現したタンパク質をコードします。この研究は、このタンパク質がin vitroウイルスの複製に不可欠であり、UL0欠失変異体が培養細胞でわずかな成長欠陥のみを示すことを示しています。ILTVのUL0遺伝子遺伝子座は、ヒトサイトメガロウイルスの即時病原体プロモーターの制御下で、高病原性鳥インフルエンザウイルスの強化GFPまたはヘマグルチニン(HA)、サブタイプH7をコードする外来DNA配列の挿入にも使用されました。外来タンパク質の発現は、(免疫)蛍光テストとウエスタンブロット分析によって示されました。鶏の実験的感染後、UL0欠失変異体は、親の野生型ILTVとUL0救助変異体の両方に比べて減衰することが判明しました。それにもかかわらず、UL0陰性ILTVで免疫したすべての動物は、その後の毒性ILTVに感染した後、臨床疾患から保護されました。さらに、HAを発現するILTVで免疫したすべての動物は、H7サブタイプの鳥インフルエンザウイルスを最小限の臨床徴候で致命的な挑戦を生き延びました。したがって、UL0陰性およびHA発現ILTV組換えは、ILTおよびFOWLペストに対する二価の生体ウイルスワクチンとして使用できます。不活性化インフルエンザウイルスワクチンとは異なり、HAを発現するILTV組換えは質量適用に適しているはずであり、フィールド内のワクチン接種とウイルスに感染した動物の間の血清学的差別も許可する必要があります。
Infectious laryngotracheitis virus (ILTV), a member of the Alphaherpesvirinae, possesses several unique genes. One of them, UL0, encodes an abundantly expressed protein that accumulates in the nuclei of ILTV-infected cells. This study demonstrates that this protein is dispensable for in vitro virus replication and that UL0 deletion mutants exhibit only minor growth defects in cultured cells. The UL0 gene locus of ILTV was also used for insertion of foreign DNA sequences encoding enhanced GFP or haemagglutinin (HA), subtype H7, of a highly pathogenic avian influenza virus under the control of the human cytomegalovirus immediate-early gene promoter. Expression of foreign proteins was shown by (immuno)fluorescence tests and Western blot analyses. After experimental infection of chickens, UL0 deletion mutants proved to be attenuated when compared to both parental wild-type ILTV and an UL0 rescue mutant. Nevertheless, all animals immunized with UL0-negative ILTV were protected from clinical disease after subsequent infection with virulent ILTV. Furthermore, all animals immunized with HA-expressing ILTV survived a lethal challenge with H7 subtype avian influenza virus with minimal clinical signs. Thus, an UL0-negative and HA-expressing ILTV recombinant may be used as a bivalent live virus vaccine against ILT and fowl plague. Unlike inactivated influenza virus vaccines, HA-expressing ILTV recombinants should be suitable for mass application and would also permit serological discrimination between vaccinated and virus-infected animals in the field.
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