中空繊維バイオリアクターの最適なNS0細胞の成長には、繊維の細胞側での血清濃度またはコレステロールサプリメントの増加が必要です

ヒト化抗体を分泌するNSO/GS細胞株は、2％血清を使用してT-flaskで日常的に伝播しました。抗体産生のスケールアップのために、この細胞株は同じ血清濃度を使用して中空繊維システムに接種されました。中空繊維システムでは代謝活性が数日間増加しましたが、細胞が7日目までに死亡したため、常に活性は劇的に低下しました。- スケールシステム。中空繊維系で見られるように、細胞側のみまたはマイクロバイオリアクターの繊維の両側で2％血清を使用したときに細胞が死亡しました。対照的に、繊維の細胞側で20％の血清を使用し、非細胞側の基礎媒体を使用すると、高い生存率で良好な細胞拡大が生じました。細胞側の血清濃度に関係なく、最大20％の血清が繊維の非細胞側に配置された場合、さらなる成長の増強は見られませんでした。これらの結果は、繊維を容易に交差させない血清成分が中空繊維バイオリアクターの細胞の成長を制限することを示唆しています。コレステロールが豊富な脂質サプリメントを添加すると、微小生物剤の細胞増殖が改善されましたが、他の非コレステロール脂質サプリメントの添加は成長の増加をもたらしませんでした。コレステロールサプリメントの成長促進特性は、血清濃度が低い場合より顕著であり、低血清濃度での成長不良は最適ではないコレステロールレベルによるものであることを示唆しています。中空繊維システムで細胞側の血清濃度が20％に増加すると、細胞は成長してバイオリアクターを満たし、39日間の生産を可能にしました。これらの結果は、このNSO細胞株が最適な成長のために細胞側面血清濃度の増加を必要とし、この要件がこの細胞株の固有のコレステロール依存性による可能性が高いことを示しています。

An NSO/GS cell line secreting a humanized antibody was routinely propagated in a T-flask using 2% serum. For scale-up of antibody production, this cell line was inoculated into a hollow fiber system using the same serum concentration. The metabolic activity increased for a few days in the hollow fiber system, but invariably the activity dropped dramatically as the cells died by day 7. A hollow fiber micro-bioreactor was used as a screening tool to examine possible reasons for cell death in the large-scale system. As seen in the hollow fiber system, cells died when 2% serum was used either on the cell side only or on both sides of the fiber in the micro-bioreactor. In contrast, the use of 20% serum on the cell side of the fiber and basal medium on the non-cell side resulted in good cell expansion at high viability. Regardless of the cell side serum concentration, no further growth enhancements were seen when up to 20% serum was placed on the non-cell side of the fiber. These results suggest that a serum component that does not readily cross the fiber is limiting cell growth in the hollow fiber bioreactors. The addition of a cholesterol-rich lipid supplement resulted in better cell growth in the micro-bioreactor, while the addition of other non-cholesterol lipid supplements resulted in no growth enhancement. The growth-enhancing properties of the cholesterol supplement were more pronounced at lower serum concentrations, suggesting that poor growth at low serum concentration was due to suboptimal cholesterol levels. When the cell side serum concentration was increased to 20% in the hollow fiber system, cells grew and filled the bioreactor, allowing a 39-day production run. These results demonstrate that this NSO cell line requires an increased cell side serum concentration for optimal growth and that this requirement is likely due to the inherent cholesterol dependency of this cell line.