マウス129株に見られるBFSP2変異は、CP49の喪失を引き起こし、レンズ繊維細胞のサイト骨格のビメンチン依存性の変化を誘導します

ここでは、マウスBFSP2遺伝子の最初の自然変異を報告します。129x1/SVJでのマウスBFSP2の特性評価により、エクソン2のアクセプター部位が削除される突然変異が明らかになりました。BFSP2転写産物のエクソン3。129S1/SVIMJ、129S2/SVPASおよび129S4/SVJAE株から分離されたレンズRNAのRT-PCR研究により、これらの多様な129株と同様の変異の両方でこの変異の存在が確認されましたが、C3HまたはC57BLの両方の株ではありませんでした。/6Jマウス株。この突然変異は、CP49と呼ばれる重度の切り捨てられたタンパク質産物をもたらすと予測されており、本質的にエクソン1のみを含むが、CP49に対するポリクローナル抗体は、129S1/SVIMJまたは129S4/SVJAのいずれかで作られた抽出物でCP49の完全な長さまたは断片を検出できなかった。これらの129株はCP49タンパク質を欠いています。BFSP2のノックアウトが最近報告されたように、フィレンシンタンパク質レベルとそのタンパク質分解プロセシングは、C57BL/6Jと比較して129S1/SVIMJおよび129S4/SVJAE株でも変化しました。129S2/SVPAのレンズサイト骨格の電子顕微鏡検査により、CP49ノックアウトと比較して細胞骨格の同様の形態学的変化が明らかになり、ビーズと中間のフィラメントは、明らかに定義されていないフィラメントのような材料に置き換えられました。ビメンチンは、免疫電子顕微鏡検査とCP49/ビメンチン二重ノックアウトマウスの生成によって示されるように、この残留物質の重要な成分でした。129および他のマウス株におけるBFSP2の自然変異のこの報告は、ノックアウト戦略で129x1/SVJ株を使用したレンズ研究にも重要な意味を持っています。

Here we report the first natural mutation in the mouse Bfsp2 gene. Characterisation of mouse Bfsp2 in the 129X1/SvJ revealed a mutation that deleted the acceptor site of exon 2. This results in exon 1 being erroneously spliced to exon 3 causing a frameshift in the reading frame and the introduction of a stop codon at position 2 of exon 3 in the Bfsp2 transcript. RT-PCR studies of lens RNA isolated from 129S1/SvImJ, 129S2/SvPas and 129S4/SvJae strains confirmed the presence of this mutation in these diverse 129 strains and similar mutations were found in both CBA and 101 strains, but not in C3H or C57BL/6J mouse strains. This mutation is predicted to result in a severely truncated protein product called CP49, comprising essentially only exon 1, but polyclonal antibodies to CP49 failed to detect either full length or fragments of CP49 in extracts made from either 129S1/SvImJ or 129S4/SvJae suggesting that these 129 strains lack CP49 protein. Like the knockout of Bfsp2 reported recently, filensin protein levels and its proteolytic processing were altered also in the 129S1/SvImJ and 129S4/SvJae strains compared to C57BL/6J. Electron microscopy of the lens cytoskeleton from 129S2/SvPas revealed similar morphological changes in the cytoskeleton as compared to the CP49 knockout, with beaded and intermediate filaments being apparently replaced by poorly defined filament-like material. Vimentin was a key component of this residual material as shown by immunoelectron microscopy and by the generation of a CP49/vimentin double knockout mouse. This report of a natural mutation in Bfsp2 in the 129 and other mouse strains also has important implications for lens studies that have used the 129X1/SvJ strain in knockout strategies.