トリパノソーマクルジからのL1TCレトロエレメントの逆転写酵素活性の特性評価

Trypanosoma cruziの非LTR（ロング末端繰り返し）レトロトランスポゾンL1TCによってコードされた組換えタンパク質RTL1TCは、ポリ（RA）/オリゴ（DT）およびポリ（RC）/オリゴを使用した逆転写酵素（RT）活性を持つことが示されています。（DG）テンプレート/プライマーとしてのホモポリマー。最適なRT活性は、5 mM mg2+、pH 8、および28〜37％の濃度で検出されました。RT触媒部位の部位指向変異誘発は、アスパラギン酸313のイソロイシン（RT D313il1TC）の置換が実質的に廃止されることを証明しました。RTL1TCタンパク質のRT活性。RT-ポリメラーゼ連鎖反応アッセイは、RTL1TCタンパク質が相同および異種RNAテンプレートの両方を使用する能力を持っていることを明らかにしました。また、RTL1TCタンパク質は、タンパク質がテンプレートとして使用するオリゴ分子の連続したスイッチングにより、相補的なDNA分子を合成できることが示されています。このテンプレートスイッチングは、レトロエレメント統合プロセスに関与する可能性があります。

The recombinant protein RTL1Tc, encoded by the non-LTR (long terminal repeat) retrotransposon L1Tc from Trypanosoma cruzi, has been shown to have reverse transcriptase (RT) activity using poly(rA)/oligo(dT) and poly(rC)/oligo(dG) homopolymers as template/primers. The optimal RT activity was detected at a concentration of 5 mM Mg2+, pH 8 and between 28 and 37% degrees C. Site-directed mutagenesis in the RT catalytic site proved that substitution of aspartic acid 313 for isoleucine (RT D313IL1Tc) practically abolishes the RT activity of the RTL1Tc protein. RT-polymerase chain reaction assays revealed that the RTL1Tc protein has the ability to use both homologous and heterologous RNA templates. Also, it is shown that the RTL1Tc protein is capable of synthesizing complementary DNA molecules by consecutive switching of the oligo molecule, which the protein uses as a template. This template switching may be involved in the retroelement integration process.