[大腸菌の遺伝子発現に対するまれなアルギニンコドンAGGおよびAGAに対応するTRNAの細胞内濃度の効果]

まれなコドンAGGおよびAGAに対応するTRNAのアルギニン濃度の増加の影響は、以前に構築されたモデルシステムで研究されました。モデルシステムは、ベータガラクトシダーゼ大腸菌のアルファドメインをコードする遺伝子の一部であり、コドンAGGとAGAで濃縮された一連の合成インサートをコードするCAT遺伝子断片からなるキメラ遺伝子です。細胞内TRNA濃度を増加させるために、AGA特異的tRNAの天然遺伝子とAgg特異的tRNAの人工遺伝子を、CO1EI ORIと互換性のあるP15A ORIの制御下でプラスミドにクローン化し、モデル遺伝子の維持に使用しました。人工AGG特異的TRNA遺伝子が機能的に活性なtRNAを産生することが示されました。これらのコドンを認識しているTRNAの遺伝子がマルチコピープラスミドで伝播されたときに、まれなコドンを含むモデルテンプレートによってコードされたポリペプチドの合成の急激な上昇が実証されました。AGA特異的なtRNAは、AGA固有のTRNAのみを効率的にagaとAggコドンとagg-aggコドンのみに効率的に翻訳することが示されました。

Influence of increased arginine concentrations of tRNA's corresponding to rare codons AGG and AGA was studied in the model system constructed earlier. The model system is a chimeric gene consisting of CAT gene fragment, part of the gene encoding for alpha-domain of beta-galactosidase E. coli and a series of synthetic inserts enriched with codons AGG and AGA. In order to increase the intracellular tRNA concentration the natural gene of AGA-specific tRNA and the artificial gene of AGG-specific tRNA were cloned in plasmid under the control of p15A ori compatible with co1EI ori and used for maintaining the model gene. It was shown that the artificial AGG-specific tRNA gene produces a functionally active tRNA. A steep rise in the synthesis of polypeptide encoded by the model template containing rare codons was demonstrated when the genes of tRNAs recognizing these codons were propagated in the multicopy plasmid. It was shown that AGA-specific tRNA efficiently translates both AGA and AGG codons while AGG-specific tRNA - only AGG codons.