藻類細胞腫の診断のための液体クロマトグラフィータンデム質量分析による血漿フリーメタネフリンとノルメタネフリンの測定

背景：血漿を含まないメタネフリンの定量化は通常、電気化学検出を伴うHPLCによって達成されますが、サンプルの調製は労働集約的で時間がかかり、実行時間は長く、干渉物質が関連するピークを不明瞭にすることがあります。この研究の目的は、プラズマを含まないメタネフリンのための敏感で特異的なLC-MS/MSメソッドを開発することでした。 方法：固相抽出後、シアノ分析カラムを使用して、ノルメタネフリン（NMN）とメタネフリン（MN）のクロマトグラフィー分離を実現しました。NMN、MN、D（3）-NMN、およびD（3）-MN陽性イオンは、特定の遷移M/Z 166-> 134、180-> 148、169-を使用して、複数反応モニタリングモードで検出されました。- > 137、および183--> 151、大気圧化学イオン化源。 結果：複数のキャリブレーション曲線が一貫した線形性と再現性を示しました。0.64、1.9、および2.7 nmol/LのNMNのInterassay Imprecision値（CV; n = 20）は、それぞれ6.6％、7.8％、および13％でした。0.60、1.2、および2.1 nmol/L（n = 20）でのMnのインターアッセイCVは、それぞれ9.2％、6.8％、および9.8％でした。内部標準に対するNMNおよびMNの平均回収率は、それぞれ100％と96％でした。アッセイは0.20〜10.0 nmol/Lの間で線形でした。HPLCおよびLC-MS/MSの結果のデミング回帰により、NMNの場合、0.93（95％信頼区間、0.89-0.98）および0.89（0.85-0.93）およびYインターセプトの-0.16および0.03 nmol/Lの勾配が得られました（n = 132）およびMn（n = 92）、それぞれ。 結論：この新しいLC-MS/MSアプローチは、血漿中の低ナノモル濃度の遊離メタネフリンの定量化のためのHPLCに正確で迅速かつ具体的な代替方法を提供します。

BACKGROUND: Quantification of plasma free metanephrines is usually accomplished by HPLC with electrochemical detection, but sample preparation is labor-intensive and time-consuming, run times are long, and interfering substances sometimes obscure the relevant peaks. The aim of this study was to develop a sensitive and specific LC-MS/MS method for plasma free metanephrines. METHODS: After solid-phase extraction, chromatographic separation of normetanephrine (NMN) and metanephrine (MN) was accomplished by use of a cyano analytical column. NMN, MN, d(3)-NMN, and d(3)-MN positive ions were detected in the multiple-reaction monitoring mode using the specific transitions m/z 166-->134, 180-->148, 169-->137, and 183-->151, respectively, with an atmospheric pressure chemical ionization source. RESULTS: Multiple calibration curves exhibited consistent linearity and reproducibility. Interassay imprecision values (CV; n = 20) for NMN at 0.64, 1.9, and 2.7 nmol/L were 6.6%, 7.8%, and 13%, respectively. Interassay CV for MN at 0.60, 1.2, and 2.1 nmol/L (n = 20) were 9.2%, 6.8%, and 9.8%, respectively. The mean recoveries of NMN and MN relative to the internal standard were 100% and 96%, respectively. The assays were linear between 0.20 and 10.0 nmol/L. Deming regression of HPLC and LC-MS/MS results yielded slopes of 0.93 (95% confidence interval, 0.89-0.98) and 0.89 (0.85-0.93) and y-intercepts of -0.16 and 0.03 nmol/L for NMN (n = 132) and MN (n = 92), respectively. CONCLUSIONS: This novel LC-MS/MS approach provides a precise, rapid, and specific alternative method to HPLC for the quantification of the low nanomolar concentrations of free metanephrines in plasma.