フォルフォリンとFASLとは独立して殺すCD8細胞に依存する腫瘍細胞のin vivo拒絶反応

パーフォリン/グランザイムB-およびFAS/FASLを介した殺害経路は、抗腫瘍免疫応答におけるCTLおよびNK細胞の主要なエフェクターメカニズムです。この研究では、D122ルイス肺癌とその遺伝子修正細胞を使用して、腫瘍の進行からの宿主の保護、および自発転移からのこれら2つの溶解機構の相対的な役割を調査しました。パーフォリンノックアウトマウス（B6-PKO）とFASおよびFASL変異体（B6-MRLおよびB6-SMN）マウスを利用して、宿主でのパーフォリン発現が転移の予防において重要な機能を果たすことがわかりました。ただし、H-2K（B）およびB7-1トランスフェクタント39.5-B7細胞の局所腫瘍拒絶は、in vivoでのパーフォリンまたはFAS/FASL発現のいずれにも依存していませんでした。さらに、39.5-B7細胞のCTL溶解は、18時間のin vitroアッセイでのパーフォリンとFAS/FASLの相互作用とは無関係でした。また、CD8 T細胞が39.5-B7の局所腫瘍を拒否する原因であることを確認しましたが、サイトカイン、TNF-alpha、およびガンマイフはin vivoでの腫瘍拒絶に関与していませんでした。さらに、カスパーゼ阻害剤（ZVAD-FMK、ZLETD-FMK、ZLEHD-FMK）を使用したブロッキングアッセイは、カスパーゼの活性化がパフォリン依存性経路によって媒介される39.5-B7溶解を誘導するために部分的に必要であることを示しました。パーフォリン非依存性メカニズムには、カスパーゼの活性化が必要でした。したがって、これらの結果は、CD8 T細胞によって媒介されるパーフォリン、Fas/Fasl、Gammaifn、およびTNF-Alpha独立溶解機構が、in vivoで39.5-B7細胞の拒絶に重要な役割を果たすことを示唆しています。カスパーゼの活性化は、CTLSによる標的のアポトーシスには事前に必要です。

Perforin/granzyme B- and Fas/FasL-mediated killing pathways are the main effector mechanisms of CTL and NK cells in antitumor immune responses. In this study, we investigated the relative role of these two lytic mechanisms in protection of the host from tumor progression, as well as spontaneous metastasis, using the D122 Lewis lung carcinoma and its gene-modified cells. Utilizing perforin knockout mice (B6-PKO) and Fas and FasL mutant (B6-MRL and B6-Smn) mice, we found that perforin expression in the host plays a crucial function in the prevention of metastasis. However, local tumor rejection of an H-2K(b) and B7-1 transfectant, 39.5-B7 cells, was not dependent either on perforin or Fas/FasL expression in vivo. In addition, CTL lysis of 39.5-B7 cells was independent of perforin and Fas/FasL interactions in 18-hour in vitro assays. We also confirmed that CD8 T-cells were responsible for rejecting 39.5-B7 local tumors, yet cytokines, TNF-alpha and gammaIFN were not involved in tumor rejection in vivo. Furthermore, blocking assays using caspase inhibitors (zVAD-fmk, zLETD-fmk and zLEHD-fmk) showed that, whereas caspase activation was partially required to induce 39.5-B7 lysis mediated by the perforin-dependent pathway, 39.5-B7 lysis by CTLs through the perforin-independent mechanism required caspase activation. Thus, these results suggested that perforin, Fas/FasL, gammaIFN and TNF-alpha independent lytic mechanisms, mediated by CD8 T cells, have a crucial role in rejection of 39.5-B7 cells in vivo. Caspase activation is a pre requisite for apoptosis of targets by CTLs.