染色せずにポリアクリルアミドゲルにおけるタンパク質の目に見える蛍光検出

重合する前にポリアクリルアミドゲルに組み込まれた2,2,2-トリクロロエタノール（TCE）は、5分未満の総処理時間でタンパク質の蛍光可視検出を提供します。タンパク質のトリプトファンは、300 nmのトランザルミネーターでタンパク質バンドを視覚化できるように、目に見える範囲に蛍光を生成するためにトリハロコンパウンドと紫外線誘導反応を起こします。以前の研究では、トリクロロ酢酸またはクロロホルムを使用して、タンパク質の視覚化のためにポリアクリルアミドゲル電気泳動（Page）ゲルを染色しました。この研究は、電気泳動の前にTCEをゲルに入れて染色ステップを排除できることを示しています。ゲルは電気泳動装置から除去され、トランスアルミネーターに配置され、タンパク質バンドは5分未満で蛍光を発症します。迅速であることに加えて、この視覚化方法は、標準的なクーマシーブリリアントブルー（CBB）法よりもわずかに感度が高い典型的な球状タンパク質の0.2マイクログの検出を提供します。CBBでよく染色されない積分膜タンパク質は、TCEインゲル法でよく視覚化されます。TCEインゲルの視覚化の後、同じゲルをCBB染色し、タンパク質の補完的な検出を可能にします。さらに、ゲル内のTCEを使用した視覚化は、2次元ページ、ネイティブページ、ウエスタンブロッティング、オートラジオグラフィーと互換性があります。

2,2,2-Trichloroethanol (TCE) incorporated into polyacrylamide gels before polymerization provides fluorescent visible detection of proteins in less than 5min of total processing time. The tryptophans in proteins undergo an ultraviolet light-induced reaction with trihalocompounds to produce fluorescence in the visible range so that the protein bands can be visualized on a 300-nm transilluminator. In a previous study trichloroacetic acid or chloroform was used to stain polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) gels for protein visualization. This study shows that placing TCE in the gel before electrophoresis can eliminate the staining step. The gel is removed from the electrophoresis apparatus and placed on a transilluminator and then the protein bands develop their fluorescence in less than 5min. In addition to being rapid this visualization method provides detection of 0.2microg of typical globular proteins, which for some proteins is slightly more sensitive than the standard Coomassie brilliant blue (CBB) method. Integral membrane proteins, which do not stain well with CBB, are visualized well with the TCE in-gel method. After TCE in-gel visualization the same gel can then be CBB stained, allowing for complementary detection of proteins. In addition, visualization with TCE in the gel is compatible with two-dimensional PAGE, native PAGE, Western blotting, and autoradiography.