CISディスプレイ：タンパク質DNA複合体のライブラリからのペプチドのin vitro選択

DNA複製イニシエータータンパク質（REPA）が発現しているテンプレートDNA、つまりCIS-Activityと呼ばれる特性にのみ結合する能力を活用するin vitroライブラリ選択システム（CISディスプレイ）の開発について説明します。多様なペプチドライブラリーは、レパをコードするDNAフラグメントに対するランダム配列のDNAフラグメントのライゲーションによって作成されます。in vitroの転写と翻訳の後、各タンパク質がそれをコードするDNAと安定して関連しているタンパク質DNA複合体のプールが形成されます。これらの複合体は、関心のある標的に対するリガンドの親和性選択に適しています。ここでは、Repaが非常に忠実なシス作用性DNA結合タンパク質であることを示し、10（12）をコードするライブラリを> 10（12）ランダム18-MERペプチドを構築し、特異的に異なるターゲットに結合するペプチドを分離するために使用できることを示しています。表示されたペプチドをコードするためにDNAを使用すると、mRNAを使用するin vitroペプチドディスプレイシステムよりも利点があります。

We describe the development of an in vitro library selection system (CIS display) that exploits the ability of a DNA replication initiator protein (RepA) to bind exclusively to the template DNA from which it has been expressed, a property called cis-activity. A diverse peptide library is created by ligation of DNA fragments of random sequence to a DNA fragment that encodes RepA. After in vitro transcription and translation, a pool of protein-DNA complexes is formed where each protein is stably associated with the DNA that encodes it. These complexes are amenable to the affinity selection of ligands to targets of interest. Here we show that RepA is a highly faithful cis-acting DNA-binding protein and demonstrate that libraries encoding >10(12) random 18-mer peptides can be constructed and used to isolate peptides that bind specifically to disparate targets. The use of DNA to encode the displayed peptides offers advantages over in vitro peptide display systems that use mRNA.