HIV感染患者におけるネルフィナビルおよびM8の細胞内および血漿薬物動態学：P糖タンパク質発現との関係

抗レトロウイルス療法の標的の1つは、HIVに感染した細胞内です。したがって、治療効果を改善するために、メシレートNelfinavirやその活性代謝産物M8などの薬物の細胞内薬物動態を、血漿薬物動態に加えて研究することが重要です。以前は、プロテアーゼ阻害剤の細胞内蓄積がin vivoで報告されており、次の階層を示しています。P糖タンパク質（P-gp）などの多剤耐性トランスポーターは、排出メカニズムを介して細胞内濃度の薬物濃度が低くなる可能性があり、したがって、聖域のサイト形成に寄与する可能性があります。この研究の目的は、HIV感染患者からの血漿および末梢血単核細胞におけるネルフィナビルとM8の濃度を決定し、細胞内蓄積とリンパ球P-GP発現の関係を確認することでした。Nelfinavir（1日2回1250 mg）およびデュアルヌクレオシド逆転写酵素阻害剤療法を受けた12人のHIV感染患者（ウイルス量<50コピー/ml）からの静脈血サンプルは、全量投与間隔（0、2、4、8、12で収集されました。h）。血漿および細胞内（細胞関連）薬物濃度は、HPLC-MS/MSによって測定されました。血漿および細胞における薬物曝露は、非コンパートメントモデリングに由来する濃度時間曲線（AUC（0-12H））の下の面積として発現しました。細胞薬物蓄積を決定するために、細胞内AUC（0-12H）/総血漿AUC（0-12H）の比率を計算しました。リンパ球上のP-GP発現は、フローサイトメトリーによって決定されました。プラズマおよび細胞区画におけるネルフィナビルの中央値（範囲）AUC（0-12H）は、それぞれ21.8 mg x H x l（-1）（5.64-50.8）および104.6 mg x h x l（-1）（23.1-265.7）でした。血漿および細胞におけるM8の対応する値は、6.60 mg x H x L（-1）（2.16-17.3）および19.6 mg x H x L（-1）（5.14-60.8）でした。血漿M8/血漿ネルフィナビル（AUC（0-12H））および細胞内M8/細胞内ネルフィナビル（AUC（0-12H））の比率は、それぞれ0.32と0.17の中央値を示しました。細胞の蓄積[中央値;（範囲）] NelfinavirとM8のものは、それぞれ5.30（2.28-16.2）と2.32（1.01-10.7）でした。血漿と細胞内ネルフィナビル最小濃度（CMIN）（R2 = 0.34; P = 0.049）の間に有意な相関がありましたが、血漿と細胞内M8 CMINの間では観察されませんでした。C（0H）濃度は、NelfinavirとM8の両方でC（12H）よりも高かった。NelfinavirまたはM8の蓄積とP-gpのリンパ球細胞表面発現との間には関係は観察されませんでした。この研究は、細胞内濃度がネルフィナビルとM8の両方の血漿濃度よりも高いことを示しており、リンパ球の蓄積を示唆しています。NelfinavirとM8の異なる細胞内蓄積のメカニズムはまだ解明されていない。流入輸送体または基本的な薬物特性の親和性が、M8よりもネルフィナビルのより大きな蓄積に大きな役割を果たす可能性があります。

One of the targets of antiretroviral therapy is within cells infected with HIV. In order to improve therapeutic efficacy, it is therefore important that the intracellular pharmacokinetics of drugs, such as nelfinavir mesylate and its active metabolite M8, are studied in addition to plasma pharmacokinetics. Previously, the intracellular accumulation of protease inhibitors has been reported in vivo, displaying the following hierarchy: nelfinavir > saquinavir > ritonavir > indinavir. Multidrug resistance transporters, such as P-glycoprotein (P-gp), may result in a lower intracellular concentration of drug via an efflux mechanism, thus contributing to sanctuary site formation. The objective of this study was to determine concentrations of nelfinavir and M8 in plasma and peripheral blood mononuclear cells from HIV-infected patients, and to ascertain the relationship between intracellular accumulation and lymphocyte P-gp expression. Venous blood samples from 12 HIV-infected patients (viral load <50 copies/ml) receiving nelfinavir (1250 mg twice daily) and dual nucleoside reverse transcriptase inhibitor therapy were collected over a full dosage interval (0, 2, 4, 8 and 12 h). Plasma and intracellular (cell-associated) drug concentrations were measured by HPLC-MS/MS. Drug exposure in plasma and cells was expressed as the area under the concentration-time curve (AUC(0-12h)), derived from non-compartmental modelling. The ratio of intracellular AUC(0-12h)/total plasma AUC(0-12h) was calculated to determine cellular drug accumulation. P-gp expression on lymphocytes was determined by flow cytometry. The median (range) AUC(0-12h) of nelfinavir in plasma and cellular compartments was 21.8 mg x h x l(-1) (5.64-50.8) and 104.6 mg x h x l(-1) (23.1-265.7), respectively. Corresponding values for M8 in plasma and cells were 6.60 mg x h x l(-1) (2.16-17.3) and 19.6 mg x h x l(-1) (5.14-60.8). A ratio of plasma M8/plasma nelfinavir (AUC(0-12h)) and intracellular M8/intracellular nelfinavir (AUC(0-12h)) gave median values of 0.32 and 0.17, respectively. The cellular accumulations [median; (range)] of nelfinavir and M8 were 5.30 (2.28-16.2) and 2.32 (1.01-10.7), respectively. A significant correlation between plasma and intracellular nelfinavir minimum concentration (Cmin) (r2=0.34; P=0.049), but not between plasma and intracellular M8 Cmin was observed. C(0h) concentrations were higher than C(12h) for both nelfinavir and M8. No relationship was observed between nelfinavir or M8 accumulation and lymphocyte cell surface expression of P-gp. This study illustrates that intracellular concentrations were higher than plasma concentrations for both nelfinavir and M8, suggesting lymphocyte accumulation. The mechanism of differential intracellular accumulation of nelfinavir and M8 remains to be elucidated. It may be that affinities for influx transporters or fundamental drug characteristics play a major role in the greater accumulation of nelfinavir than M8.