プロスタグランジンFシンターゼによるプロスタグランジンfエタノールアミドの合成と酵素の強力な阻害剤としてのビマトプロストの同定：LC/ESI/MSを使用した新しい酵素アッセイ法

プロスタグランジン（PG）D（2）エタノールアミド（プロスタミドD（2））は、PGFシンターゼによって9ALPHA、11BETA-PGF（2）エタノールアミド（9アルファ、11beta-プロスタミドF（2））に減少しました。（2）およびPGD（2）からPGF（2ALPHA）および9ALPHA、11beta-PGF（2）。これらの酵素活性は、新しい方法である液体クロマトグラフィーエレクトロスプレーイオン化質量分析（LC/ESI/MS）技術によって測定され、基質とすべての製品を同時に検出できます。PGF（2ALPHA）、9ALPHA、11BETA-PGF（2）、PGD（2）、PGH（2）、9ALPHA、11BETA-PROSTAMIDE F（2）、およびプロスタミドD（2）は、TSKGEL ODS 80TSカラム、イオン化エレクトロスプレーによって、ネガティブモードで検出されます。M/Z 353（[M-H]（ - ））、353（[M-H]（ - ））、351（[M-H]（ - ））の選択されたイオンモニタリング（SIM）、333（[M-H-H）（2）O]（- ））、456（[M+59]（ - ））、およびM/Z 358（[M-37]（ - ））を使用して、PGF（2Alpha）、9alpha、11beta-PGF（2）、PGDを定量化しました。（2）、PGH（2）、9alpha、11beta-prostamide F（2）、およびプロスタミドD（2）。PGF（2alpha）および9alphaの検出限界、11beta-PGF（2）は0.01pmolでした。PGH（2）およびPGD（2）の場合、0.1pmol;プロスタミドD（2）および9alpha、11beta-prostamide F（2）、0.5および0.03pmolのそれぞれ。PGFシンターゼ活性を測定するためのLC/ESI/MS技術は、他の方法よりも高い感度を示しました。この方法を使用して、17-フェニルトリノールPGF（2ALPHA）のエチルアミド類似体であるビマトプロストと抗緑内腫剤が、低濃度で使用するとPGFシンターゼの3つのレダクターゼ活性すべてを阻害することがわかりました。これらの結果は、ビマトプロストがプロスタミド様活性を有することに加えて、強力なPGFシンターゼ阻害剤としても動作することを示唆しています。

Prostaglandin (PG) D(2) ethanolamide (prostamide D(2)) was reduced to 9alpha,11beta-PGF(2) ethanolamide (9alpha,11beta-prostamide F(2)) by PGF synthase, which also catalyzes the reduction of PGH(2) and PGD(2) to PGF(2alpha) and 9alpha,11beta-PGF(2), respectively. These enzyme activities were measured by a new method, the liquid chromatographic-electrospray ionization-mass spectrometry (LC/ESI/MS) technique, which could simultaneously detect the substrate and all products. PGF(2alpha), 9alpha,11beta-PGF(2), PGD(2), PGH(2), 9alpha,11beta-prostamide F(2), and prostamide D(2) were separated on a TSKgel ODS 80Ts column, ionized by electrospray, and detected in the negative mode. Selected ion monitoring (SIM) of m/z 353 ([M-H](-)), 353 ([M-H](-)), 351 ([M-H](-)), 333 ([M-H-H(2)O](-)), 456 ([M+59](-)), and m/z 358 ([M-37](-)) was used for quantifying PGF(2alpha), 9alpha,11beta-PGF(2), PGD(2), PGH(2), 9alpha,11beta-prostamide F(2), and prostamide D(2), respectively. The detection limit for PGF(2alpha) and 9alpha,11beta-PGF(2) was 0.01pmol; that for PGH(2) and PGD(2), 0.1pmol; and that for prostamide D(2) and 9alpha,11beta-prostamide F(2), 0.5 and 0.03pmol, respectively. The LC/ESI/MS technique for measuring PGF synthase activity showed higher sensitivity than other methods. Using this method, we found that Bimatoprost, the ethyl amide analog of 17-phenyl-trinor PGF(2alpha) and an anti-glaucoma agent, inhibited all three reductase activities of PGF synthase when used at a low concentration. These results suggest that Bimatoprost also behaves as a potent PGF synthase inhibitor in addition to having prostamide-like activity.