高悪性度の乳がんにおけるC-MYC癌遺伝子の増幅と過剰発現の相関：魚、in situハイブリダイゼーション、免疫組織化学分析

この研究では、蛍光in situハイブリダイゼーション（FISH）、in situハイブリダイゼーションおよび非放射性ハイブリダイゼーションおよび免疫組織化学を使用して、高悪性度のヒト乳がんのアーカイブ組織標本上のC-MYC遺伝子の遺伝子増幅、RNA発現、およびタンパク質発現を分析しました。私たちが取り組んだ特定の質問は、C-Myc mRNAとタンパク質の発現が魚によって決定されるように、その遺伝子コピー増幅と相関しているかどうかでした。C-MYCはヒト乳がんで最も一般的に増幅された癌遺伝子の1つですが、ヒト乳房腫瘍組織切片での遺伝子コピー増幅、RNA転写、タンパク質発現を直接分析するためにその場アプローチを利用した研究はほとんどありません。現在、敏感な魚の技術を使用することにより、エストロゲン受容体の状態に関係なく、高悪性度の乳がんの高い割合（70％）がC-MYC遺伝子に対して増幅されたと報告しています。ただし、増幅のレベルは低く、遺伝子増加の1〜4コピーの範囲であり、この遺伝子増幅を伴う症例の大部分（84％）は1〜2コピーのみを獲得しました。症例の約92％がC-Myc RNA転写に対して陽性であり、すべてがC-Mycタンパク質発現を実証しました。実際、広範囲の発現レベルが検出されました。統計的に有意な相関は、遺伝子増幅指数、RNA発現スコア、およびタンパク質発現スコア間で特定されました。魚によって検出されたC-Myc遺伝子増幅は、浸潤細胞のin situハイブリダイゼーションの強度（p = 0.0067）とmRNA発現の陽性侵襲細胞の割合（mRNA発現）の割合によって測定されるように、そのmRNAの発現と有意に関連していた（そのmRNAの発現と有意に関連していた。p = 0.0006）。C-MYC遺伝子増幅は、浸潤細胞の免疫組織化学によって検出されたように、高レベルのタンパク質を発現した腫瘍細胞の割合とも相関していました（P = 0.0016）。したがって、複数のメカニズムはC-MYCの正常および異常な発現を調節することが知られていますが、この研究では、高品質のヒト乳癌を評価するためにその場での方法論が使用されたこの研究では、C-MYCの遺伝子増幅は重要な役割を果たすようです。mRNAとタンパク質の発現を調節します。

In this study, we analysed gene amplification, RNA expression and protein expression of the c-myc gene on archival tissue specimens of high-grade human breast cancer, using fluorescent in situ hybridisation (FISH), nonradioactive in situ hybridisation and immunohistochemistry. The specific question that we addressed was whether expression of c-Myc mRNA and protein were correlated with its gene copy amplification, as determined by FISH. Although c-Myc is one of the most commonly amplified oncogenes in human breast cancer, few studies have utilised in situ approaches to directly analyse the gene copy amplification, RNA transcription and protein expression on human breast tumour tissue sections. We now report that by using the sensitive FISH technique, a high proportion (70%) of high-grade breast carcinoma were amplified for the c-myc gene, irrespective of status of the oestrogen receptor. However, the level of amplification was low, ranging between one and four copies of gene gains, and the majority (84%) of the cases with this gene amplification gained only one to two copies. Approximately 92% of the cases were positive for c-myc RNA transcription, and essentially all demonstrated c-myc protein expression. In fact, a wide range of expression levels were detected. Statistically significant correlations were identified among the gene amplification indices, the RNA expression scores and protein expression scores. c-myc gene amplification, as detected by FISH, was significantly associated with expression of its mRNA, as measured by the intensity of in situ hybridisation in invasive cells (P=0.0067), and by the percentage of invasive cells positive for mRNA expression (P=0.0006). c-myc gene amplification was also correlated with the percentage of tumour cells which expressed high levels of its protein, as detected by immunohistochemistry in invasive cells (P=0.0016). Thus, although multiple mechanisms are known to regulate normal and aberrent expression of c-myc, in this study, where in situ methodologies were used to evaluate high-grade human breast cancers, gene amplification of c-myc appears to play a key role in regulating expression of its mRNA and protein.