ダンシル誘導体化を使用して実行される単一の高速液体クロマトグラフィー内の森林樹木組織と細胞培養のアミノ酸とポリアミンの同時分離と定量化

本研究の目的は、同じマトリックス内のダンシル化アミノ酸と一般的なポリアミンの同時分離と定量化のための迅速なHPLC法を開発して、森林樹の組織と細胞培養を分析することでした。ダンシルアミノ酸のみの分離のために以前に公開されたHPLCメソッドと比較して、この方法に組み込まれた主要な修正には、次のものが含まれます。10cmカラムを使用して、合計実行時間を約15分削減します。ダンシル誘導体化プロセスと勾配プロファイルの修飾は、同じ走行内でアミノ酸と一般的なポリアミンを溶出させます。各実行内の列クリーニングのためのステップの追加。再平衡時間の短い;そして最後に、サンプルのループの端にある列のクリーニングと物理的に反転します。これらの変化により、ピーク分解能が改善され、列の寿命が数倍になりました。成熟した森林の木からの1000を超える葉のサンプルは、これらの変化を組み込む前に200〜250のサンプルと比較して、同じカラムで分析できます。この方法は、40分以内に22のアミノ酸と44〜47分間の3つの一般的なポリアミンすべてを溶出しました。合計実行時間は、アミノ酸のみで53.6分、アミノ酸とポリアミンの両方で55.6分です。

The objective of the present study was to develop a rapid HPLC method for simultaneous separation and quantitation of dansylated amino acids and common polyamines in the same matrix for analyzing forest tree tissues and cell cultures. The major modifications incorporated into this method as compared to previously published HPLC methods for separation of only dansyl amino acids include: use of a 10 cm column to reduce the total run time by approximately 15 min; modification of the dansyl derivatization process and gradient profile to elute amino acids and common polyamines within the same run; addition of steps for column cleaning within each run; shorter re-equilibration time; and finally, column cleaning and physically reversing the column at the end of a loop of samples. These changes improved peak resolution and increased column longevity by several-fold. Over 1000 foliar samples from mature forest trees could be analyzed with the same column as compared to only 200-250 samples before the incorporation of these changes. This method eluted 22 amino acids within 40 min plus all three common polyamines between 44 and 47 min. The total run time is 53.6 min for amino acids only and 55.6 min for both amino acids and polyamines.