全血、末梢単核細胞、血漿中のエプスタインバーウイルス負荷を測定するためのリアルタイムPCRと相まって、自動化されたDNA抽出の評価

背景：血液中のエプスタインバーウイルス（EBV）DNA負荷モニタリングは、EBV関連疾患の診断に不可欠であることが示されています。ただし、EBV DNA負荷を評価するために現在使用されている方法は、多くの場合時間がかかり、以前の血液分離が必要です。 目的：この研究の目的は、MAGNA純粋な抽出器を使用した自動化されたDNA抽出後の全血、末梢血単核細胞（PBMC）および血漿中のEBV DNA負荷モニタリングの相対診断値を評価することでした。LC-PCR）。 研究デザイン：最初に、EBV DNA負荷は、104 PBMC標本で自動化または手動抽出後に遡及的に評価されました。第二に、EBV DNA負荷は、EBV関連疾患の患者（グループ1、n = 20）、HIVセロ陽性の個人（Group 2、n = n = n = n = n = n = n = from Samplesの全血、PBMC、および100サンプルのプラズマの自動抽出手順で前向きに決定されました。66）、および健康なEBVキャリア（グループ3、n = 14）。 結果：104 PBMC標本の自動抽出と手動抽出の間に良好な相関が観察されました（r = 0.956; P <0.0001）。前向き研究では、全血とPBMCの両方で67のサンプルが陽性であり、全血とPBMCのEBV DNA負荷の間に良好な相関がありました（r = 0.936; P <0.0001）。血漿では陽性のサンプルは18/100のみでした。グループ2および3からよりも、グループ1の3つの血液区画でより高いウイルス量が定期的に観察されました。 結論：この研究は、EBV DNAの自動抽出がPBMCよりも全血または血漿で実行するのが簡単であることを実証し、リアルタイムの定量的PCRによるEBV DNA測定の標準化を促進することを実証しました。全血におけるEBV DNA負荷の定量的検出は、おそらくプラスマティックEBV DNAの急速な喪失のために、免疫能のある患者の感染性単核核球症の血漿よりも敏感に見えました。移植患者では、全血および血漿中のEBV DNA負荷モニタリングは、移植後のリンパ増殖性疾患（PTLD）の早期診断の実現可能性と精度の点で同等であることが判明しました。

BACKGROUND: Epstein-Barr virus (EBV) DNA load monitoring in blood has been shown to be essential for the diagnosis of EBV-associated diseases. However, the methods currently used to assess EBV DNA load are often time-consuming and require prior blood separation. OBJECTIVES: The aim of this study was to evaluate the relative diagnostic value of EBV DNA load monitoring in whole blood, peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) and plasma after automated DNA extraction using the MagNA Pure extractor followed by LightCycler real-time quantitative PCR (LC-PCR). STUDY DESIGN: First, EBV DNA load was assessed retrospectively after automated or manual extraction on 104 PBMC specimens. Second, EBV DNA load was determined prospectively with the automated extraction procedure in the whole blood, PBMCs and plasma of 100 samples from patients with EBV-related diseases (group 1, n = 20), HIV-seropositive individuals (group 2, n = 66), and healthy EBV carriers (group 3, n = 14). RESULTS: A good correlation was observed between automated and manual extraction on 104 PBMC specimens (r = 0.956; P < 0.0001). In the prospective study, 67 samples were positive in both whole blood and PBMCs, with a good correlation between EBV DNA loads in whole blood and PBMCs (r = 0.936; P < 0.0001). Only 18/100 samples were positive in plasma. Higher viral loads were regularly observed in the three blood compartments from group 1 than from groups 2 and 3. CONCLUSION: This study demonstrated that an automated extraction of EBV DNA is easier to perform in whole blood or plasma than in PBMCs and facilitates the standardisation of EBV DNA measurement by real-time quantitative PCR. The quantitative detection of EBV DNA load in whole blood appeared more sensitive than in plasma for infectious mononucleosis in immunocompetent patients, probably because of a rapid loss of plasmatic EBV DNA. In transplant patients, EBV DNA load monitoring in whole blood and in plasma turned out to be equivalent in terms of feasibility and accuracy for the early diagnosis of post-transplant lymphoproliferative diseases (PTLDs).