アパクトンは、調節されたエキソサイトーシス中のアクチン細胞骨格のリモデリングに関与しています

アパクトンは、Zymogen顆粒タンパク質ムクリンも生じた前駆体であるプロムクリンに由来する80 kDa I型膜糖タンパク質です。以前の研究では、アピクトンが調節された分泌経路から効率的に除去され、膵腺房細胞のアクチンが豊富な頂端原形質膜を標的とすることが示されました。アパクトンのサイトゾル尾部（C-Tail）は、16のアミノ酸で構成されており、THRカゼインキナーゼIIおよびSERプロテインキナーゼCリン酸化部位、およびC末端PDZ結合ドメインがあります。腺房細胞の分泌刺激は、THRリン酸化の減少とアパクトのSerリン酸化の増加を引き起こします。リン酸化依存的に、C-Tailドメインプルダウンアクチン、エズリン、およびEBP50/NHERFの融合ペプチド。HIV TAT-C-Tail融合ペプチドは、アクチン細胞骨格に対する効果を研究するために、生きた膵臓細胞の支配的な陰性構造として使用されました。分泌刺激中、TAT-C-Tail-THR/ASPリン膜模倣ペプチドは、頂端表面でアクチン被覆Zymogen顆粒の増加を引き起こし、Tat-C-Tail-S/Dリン酸化ペプチドはアクチン細胞骨格の広がりを引き起こしました。これらのデータは、刺激を介したTHR脱リン酸化により、アパクトンとEBP50/NHERFとの関連が減少し、Zymogen顆粒をコーティングするためにアクチンリモデリングを促進することを示しています。刺激を介したSERリン酸化は、アクチン細胞骨格とのアピクトンの関連を増加させ、頂端表面にアクチンマイクロフィラメントの緊密なバンドルを維持します。したがって、アパクトンは、アピクトンCテールのリン酸化によって制御される方法で、調節されたエキソサイトーシス中の頂端細胞骨格のリモデリングに関与しています。

Apactin is an 80-kDa type I membrane glycoprotein derived from pro-Muclin, a precursor that also gives rise to the zymogen granule protein Muclin. Previous work showed that apactin is efficiently removed from the regulated secretory pathway and targeted to the actin-rich apical plasma membrane of the pancreatic acinar cell. The cytosolic tail (C-Tail) of apactin consists of 16 amino acids, has Thr casein kinase II and Ser protein kinase C phosphorylation sites, and a C-terminal PDZ-binding domain. Secretory stimulation of acinar cells causes a decrease in Thr phosphorylation and an increase in Ser phosphorylation of apactin. Fusion peptides of the C-Tail domain pulldown actin, ezrin, and EBP50/NHERF in a phosphorylation-dependent manner. HIV TAT-C-Tail fusion peptides were used as dominant negative constructs on living pancreatic cells to study effects on the actin cytoskeleton. During secretory stimulation, TAT-C-Tail-Thr/Asp phosphomimetic peptide caused an increase in actin-coated zymogen granules at the apical surface, while TAT-C-Tail-S/D phosphomimetic peptide caused a broadening of the actin cytoskeleton. These data indicate that stimulation-mediated Thr dephosphorylation allows decreased association of apactin with EBP50/NHERF and fosters actin remodeling to coat zymogen granules. Stimulation-mediated Ser phosphorylation increases apactin association with the actin cytoskeleton, maintaining tight bundling of actin microfilaments at the apical surface. Thus, apactin is involved in remodeling the apical cytoskeleton during regulated exocytosis in a manner controlled by phosphorylation of the apactin C-Tail.