著名医師による解説が無料で読めます
すると翻訳の精度が向上します
異なる活性化段階でのTリンパ球の遺伝子発現分析の正常化に使用した場合、細胞数の指標として、18S rRNA、ベータ - アクチンmRNAおよびグリセルアルデヒドデヒドロゲナーゼ（GAPDH）の細胞数の指標としての精度を調査しました。定量的リアルタイム逆転写酵素 - ポリメラーゼ連鎖反応を使用して、18S rRNA、ベータ - アクチンmRNA、GAPDH mRNA、およびmRNAの発現レベルを決定しました。ポリクローナルT細胞活性化にさらされたPBMC。活性化および安静時のPBMCおよび腸のリンパ球の18S rRNAレベルは本質的に同じでしたが、ベータアクチンとGAPDH mRNAのレベルは活性化時に著しく変動しました。分離されたGammadeltatcr（+）、CD4（+）、およびCD8（+）サブポピュレーションが研究された場合、18S rRNAレベルは21時間の活性化後も変化しませんでしたが、96時間後にはわずかに増加しました。対照的に、活性化時にこれらの細胞集団でGAPDH mRNA/細胞の30〜70倍の増加がありました。サイトカイン分析により、18S rRNAの正規化のみが、細胞あたりのmRNA発現レベルを満足に反映した結果をもたらしたことが明らかになりました。結論として、18S rRNAは最も安定したハウスキーピング遺伝子であり、したがって、ヒトTリンパ球のmRNA発現レベルの比較分析における正常化に優れていました。
異なる活性化段階でのTリンパ球の遺伝子発現分析の正常化に使用した場合、細胞数の指標として、18S rRNA、ベータ - アクチンmRNAおよびグリセルアルデヒドデヒドロゲナーゼ（GAPDH）の細胞数の指標としての精度を調査しました。定量的リアルタイム逆転写酵素 - ポリメラーゼ連鎖反応を使用して、18S rRNA、ベータ - アクチンmRNA、GAPDH mRNA、およびmRNAの発現レベルを決定しました。ポリクローナルT細胞活性化にさらされたPBMC。活性化および安静時のPBMCおよび腸のリンパ球の18S rRNAレベルは本質的に同じでしたが、ベータアクチンとGAPDH mRNAのレベルは活性化時に著しく変動しました。分離されたGammadeltatcr（+）、CD4（+）、およびCD8（+）サブポピュレーションが研究された場合、18S rRNAレベルは21時間の活性化後も変化しませんでしたが、96時間後にはわずかに増加しました。対照的に、活性化時にこれらの細胞集団でGAPDH mRNA/細胞の30〜70倍の増加がありました。サイトカイン分析により、18S rRNAの正規化のみが、細胞あたりのmRNA発現レベルを満足に反映した結果をもたらしたことが明らかになりました。結論として、18S rRNAは最も安定したハウスキーピング遺伝子であり、したがって、ヒトTリンパ球のmRNA発現レベルの比較分析における正常化に優れていました。
The accuracy of 18S rRNA, beta-actin mRNA and glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) mRNA as indicators of cell number when used for normalization in gene expression analysis of T lymphocytes at different activation stages was investigated. Quantitative real-time reverse transcriptase-polymerase chain reaction was used to determine the expression level of 18S rRNA, beta-actin mRNA, GAPDH mRNA and mRNA for six cytokines in carefully counted samples of resting human peripheral blood mononuclear cells (PBMCs), intestinal lymphocytes and PBMCs subjected to polyclonal T-cell activation. The 18S rRNA level in activated and resting PBMCs and intestinal lymphocytes was essentially the same, while the levels of beta-actin and GAPDH mRNAs fluctuated markedly upon activation. When isolated gammadeltaTCR(+), CD4(+) and CD8(+) subpopulations were studied, 18S rRNA levels remained unchanged after 21 h of activation but increased slightly after 96 h. In contrast, there was a 30-70-fold increase of GAPDH mRNA/cell in these cell populations upon activation. Cytokine analysis revealed that only normalization to 18S rRNA gave a result that satisfactorily reflected their mRNA expression levels per cell. In conclusion, 18S rRNA was the most stable housekeeping gene and hence superior for normalization in comparative analyses of mRNA expression levels in human T lymphocytes.
医師のための臨床サポートサービス
ヒポクラ x マイナビのご紹介
無料会員登録していただくと、さらに便利で効率的な検索が可能になります。