蛍光タンパク質を含む細菌の部位固有のタグ付けのためのミニ-TN7トランスポゾン

Mini-TN7トランスポゾンシステムは、タグ付けDNAがユニークで中性染色体部位に挿入されるバクテリアの部位固有のタグ付けのための便利なツールです。Escherichia coli Lac由来のプロモーターP（A1/04/03）、または成長率依存性大腸菌プロモーターPRRNB P1から、異なる蛍光タンパク質（安定および不安定）を発現するミニ-TN7送達プラスミドのパネルを拡大しました。。ミニ-TN7トランスポゾンを挿入し、土壌細菌であるPseudomonas Putida KT2440でテストしました。成功したサイト固有のタグ付けは、SouthernブロットとPCRによって検証されました。さらに、細胞成長速度に対する蛍光タンパク質発現の効果は、成長競合アッセイによってテストされました。

The mini-Tn7 transposon system is a convenient tool for site-specific tagging of bacteria in which the tagging DNA is inserted at a unique and neutral chromosomal site. We have expanded the panel of mini-Tn7 delivery plasmids expressing different fluorescent proteins (stable and unstable) from the Escherichia coli lac derived promoter, P(A1/04/03), or from the growth-rate-dependent Escherichia coli promoter PrrnB P1. The mini-Tn7 transposons were inserted and tested in the soil bacterium, Pseudomonas putida KT2440. Successful and site-specific tagging was verified by Southern blots as well as by PCR. Furthermore, the effect of fluorescent protein expression on the cellular growth rate was tested by growth competition assays.