ラットの内側の血液網膜バリアでのクレアチン輸送体（CRT）を介したクレアチンの血液から網膜への輸送

この研究の目的は、in vivoおよびin vitroでの血液網膜バリア（BRB）を横切る血液から網膜のクレアチン輸送のメカニズムを解明し、責任あるトランスポーターを特定することでした。in vivoでBRBを横切るクレアチン輸送および内部BRB（TR-IBRB2細胞）のin vitroモデルでのクレアチン輸送は、[（14）c]クレアチンを使用して調べました。クレアチン輸送体（CRT）の同定と局在は、RT-PCR、ウエスタンブロット、および免疫ペルオキシダーゼ電子顕微鏡分析によって実施されました。in vivo in vivo静脈内投与研究により、[（14）c]クレアチンは、網膜と血液の間に存在するクレアチン濃度勾配に対して血液から網膜に輸送されることが示唆されました。[（14）C] TR-IBRB2細胞によるクレアチン摂取は、飽和、Na（+） - およびCl（ - ） - CRT阻害剤によって依存および阻害され、CRTが内部BRBでのクレアチン輸送に関与していることを示唆しています。RT-PCRおよびウエスタンブロット分析は、CRTがラット網膜およびTR-IBRB2細胞で発現することを実証しました。さらに、免疫ペルオキシダーゼ電子顕微鏡分析を使用して、CRT免疫反応性がラット網膜毛細血管内皮細胞の管腔膜と青ul膜膜の両方で発見されました。結論として、CRTは内側のBRBで発現し、内側のBRBを横切る血液から網膜のクレアチン輸送に役割を果たします。

The purpose of this study was to elucidate the mechanisms of blood-to-retina creatine transport across the blood-retinal barrier (BRB) in vivo and in vitro, and to identify the responsible transporter(s). The creatine transport across the BRB in vivo and creatine uptake in an in vitro model of the inner BRB (TR-iBRB2 cells) were examined using [(14)C]creatine. Identification and localization of the creatine transporter (CRT) were carried out by RT-PCR, western blot, and immunoperoxidase electron microscopic analyses. An in vivo intravenous administration study suggested that [(14)C]creatine is transported from the blood to the retina against the creatine concentration gradient that exists between the retina and blood. [(14)C]Creatine uptake by TR-iBRB2 cells was saturable, Na(+)- and Cl(-)-dependent and inhibited by CRT inhibitors, suggesting that CRT is involved in creatine transport at the inner BRB. RT-PCR and western blot analyses demonstrated that CRT is expressed in rat retina and TR-iBRB2 cells. Moreover, using an immunoperoxidase electron microscopic analysis, CRT immunoreactivity was found at both the luminal and abluminal membranes of the rat retinal capillary endothelial cells. In conclusion, CRT is expressed at the inner BRB and plays a role in blood-to-retina creatine transport across the inner BRB.