3T3-L1脂肪細胞の脂肪細胞分化の初期段階でのペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマリガンドの調節生産

ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマ（PPARGAMMA）は、脂肪生成とインスリン感受性に重要な核ホルモン受容体です。PPARGAMMAのリガンドには、いくつかの多価不飽和脂肪酸とプロスタノイド、および合成高親和性抗糖尿病剤チアゾリジンジオンが含まれます。しかし、生物学的に関連する内因性Ppargammaリガンドの同一性は不明であり、脂肪細胞の発達中の内因性Ppargammaリガンドの生成を調節する可能性のある要因に限られた洞察が存在します。この質問に対処するために、ベータガラクトシダーゼベースのPPARGAMMAリガンドセンシングベクターシステムを運ぶ3T3-L1前脂肪細胞のラインを作成しました。このシステムでは、脂肪生成の誘導により、ベータガラクトシダーゼ活性の上昇が生じ、リガンド結合ドメイン（LBD）を介したPPARGAMMAの活性化を意味し、リガンド部分の生成および/または蓄積を示唆しています。推定内因性リガンドは、cAMPの増加に応じて脂肪生成の初期に現れ、培地に蓄積され、脂肪形成の後半で消散しました。有機的に抽出され、高圧液体クロマトグラフィグランスグランス化された条件付けされた培地は、分化細胞からではなく、成熟した脂肪細胞からではなく、この活性を豊かにしました。有機抽出物内の1つ以上の成分は、そのLBDとの相互作用を介して活性化されたPpargammaを、3T3-L1細胞の脂質蓄積を分化混合物と同じくらい効率的に誘導し、PpargammaのLBDへのロシリタゾンの結合を競い合いました。活性種は、以前に特定された他のppargammaリガンドとは異なるようです。我々の発見は、新規生物学的に関連するppargammaリガンドが、脂肪生成中に3T3-L1細胞で一時的に産生されることを示唆しています。

Peroxisome proliferator-activated receptor-gamma (PPARgamma) is a nuclear hormone receptor that is critical for adipogenesis and insulin sensitivity. Ligands for PPARgamma include some polyunsaturated fatty acids and prostanoids and the synthetic high affinity antidiabetic agents thiazolidinediones. However, the identity of a biologically relevant endogenous PPARgamma ligand is unknown, and limited insight exists into the factors that may regulate production of endogenous PPARgamma ligands during adipocyte development. To address this question, we created a line of 3T3-L1 preadipocytes that carry a beta-galactosidase-based PPARgamma ligand-sensing vector system. In this system, induction of adipogenesis resulted in elevated beta-galactosidase activity that signifies activation of PPARgamma via its ligand-binding domain (LBD) and suggests generation and/or accumulation of a ligand moiety. The putative endogenous ligand appeared early in adipogenesis in response to increases in cAMP, accumulated in the medium, and dissipated later in adipogenesis. Organically extracted and high pressure liquid chromatography-fractionated conditioned media from differentiating cells, but not from mature adipocytes, were enriched in this activity. One or more components within the organic extract activated PPARgamma through interaction with its LBD, induced lipid accumulation in 3T3-L1 cells as efficiently as the differentiation mixture, and competed for binding of rosiglitazone to the LBD of PPARgamma. The active species appears to be different from other PPARgamma ligands identified previously. Our findings suggest that a novel biologically relevant PPARgamma ligand is transiently produced in 3T3-L1 cells during adipogenesis.