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目的：免疫組織化学（IHC）およびフローサイトメトリー（FACS）におけるマクロファージ（MPHI）の3つの抗CD68モノクローナル抗体（MAB）の特異性を調査する。 方法：IHCは、抗CD68 MABS KP1、EBM11、およびPGM1、および線維芽細胞（FB）マーカーCD90およびPlolyl 4-ヒドロ酸素酵素を使用して、リウマチ関節炎（RA）および変形性関節症（OA）滑膜膜（OA）滑膜膜のクレオスタット切片で実施されました。CD68の発現は、単球細胞株THP-1およびU937、ならびに滑膜線維芽細胞（SFB）、皮膚FB、および歯肉FB（表面および細胞内染色の両方）のFACSによって分析されました。 結果：IHCでは、CD68（MABS KP1とEBM11）とFBマーカーCD90/プロリル4-ヒドロキシラーゼ、および拡散浸潤、およびRAおよびOA滑膜の間質との間に重複がありました。THP-1およびU937細胞のFACS分析では、抗CD68 MABS KP1およびEBM11の陽性細胞の割合は、固定細胞の表面染色から、前固定細胞の表面染色、細胞内染色まで徐々に増加しました。異なるFBの細胞内FACでは、ほぼすべての細胞がKP1とEBM11で陽性でしたが、PGM1ではわずかな割合しかありませんでした。表面染色FACSでは、FBのごく一部が3つの抗CD68 mAbすべてで陽性でした。 結論：CD68（MABS KP1またはEBM11）とFBマーカーCD90またはProLyl 4-ヒドロキシラーゼの重複は、IHCまたはIHCまたは細胞内FACでの単球細胞およびFBでのMPHIのMPHIの明確な同定を防ぐ可能性があります。これは、まったく異なる細胞系統による一般的なマーカーの共有による可能性があります。
目的：免疫組織化学（IHC）およびフローサイトメトリー（FACS）におけるマクロファージ（MPHI）の3つの抗CD68モノクローナル抗体（MAB）の特異性を調査する。 方法：IHCは、抗CD68 MABS KP1、EBM11、およびPGM1、および線維芽細胞（FB）マーカーCD90およびPlolyl 4-ヒドロ酸素酵素を使用して、リウマチ関節炎（RA）および変形性関節症（OA）滑膜膜（OA）滑膜膜のクレオスタット切片で実施されました。CD68の発現は、単球細胞株THP-1およびU937、ならびに滑膜線維芽細胞（SFB）、皮膚FB、および歯肉FB（表面および細胞内染色の両方）のFACSによって分析されました。 結果：IHCでは、CD68（MABS KP1とEBM11）とFBマーカーCD90/プロリル4-ヒドロキシラーゼ、および拡散浸潤、およびRAおよびOA滑膜の間質との間に重複がありました。THP-1およびU937細胞のFACS分析では、抗CD68 MABS KP1およびEBM11の陽性細胞の割合は、固定細胞の表面染色から、前固定細胞の表面染色、細胞内染色まで徐々に増加しました。異なるFBの細胞内FACでは、ほぼすべての細胞がKP1とEBM11で陽性でしたが、PGM1ではわずかな割合しかありませんでした。表面染色FACSでは、FBのごく一部が3つの抗CD68 mAbすべてで陽性でした。 結論：CD68（MABS KP1またはEBM11）とFBマーカーCD90またはProLyl 4-ヒドロキシラーゼの重複は、IHCまたはIHCまたは細胞内FACでの単球細胞およびFBでのMPHIのMPHIの明確な同定を防ぐ可能性があります。これは、まったく異なる細胞系統による一般的なマーカーの共有による可能性があります。
OBJECTIVES: To investigate the specificity of three anti-CD68 monoclonal antibodies (mAbs) for macrophages (Mphi) in immunohistochemistry (IHC) and flow cytometry (FACS). METHODS: IHC was performed on cryostat sections of rheumatoid arthritis (RA) and osteoarthritis (OA) synovial membranes using the anti-CD68 mAbs KP1, EBM11, and PGM1, and the fibroblast (FB) markers CD90 and prolyl 4-hydroxylase. Expression of CD68 was also analysed by FACS on the monocytic cell lines THP-1 and U937, as well as on synovial fibroblasts (SFB), skin FB, and gingival FB (both surface and intracellular staining). RESULTS: In IHC, there was an overlap between CD68 (mAbs KP1 and EBM11) and the FB markers CD90/prolyl 4-hydroxylase in the lining layer, diffuse infiltrates, and stroma of RA and OA synovial membranes. In FACS analysis of THP-1 and U937 cells, the percentage of cells positive for the anti-CD68 mAbs KP1 and EBM11 progressively increased from surface staining of unfixed cells, to surface staining of pre-fixed cells, to intracellular staining of the cells. Upon intracellular FACS of different FB, nearly all cells were positive for KP1 and EBM11, but only a small percentage for PGM1. In surface staining FACS, a small percentage of FB were positive for all three anti-CD68 mAbs. CONCLUSION: An overlap between CD68 (mAbs KP1 or EBM11) and the FB markers CD90 or prolyl 4-hydroxylase may prevent unequivocal identification of Mphi in synovial tissue by IHC or in monocytic cells and FB upon intracellular FACS. This may be due to sharing of common markers by completely different cell lineages.
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