毛細血管等電力焦点によるタンパク質の等電点の測定

ここでは、毛細血管等電力焦点のタンパク質の等電点（PI）を決定するさまざまな方法をレビューします。液相での直接pH測定が不可能であるため、このような評価はPIマーカーの使用に依存する必要があります。さまざまなタイプのPIマーカーが記載されています：染料、蛍光標識ペプチド、既知のPI値のタンパク質のセット。おそらく、最高のシステムは、280 nmで簡単に検出するために、それぞれをTRP残基をそれぞれ封じ込めるように作られた16の合成ペプチドのセットであると思われます。酸性（ASP、GLU）、軽度の塩基性、中立性（HIS）、および塩基性（Lys、ARG）アミノ酸の周りのPKを慎重にブレンドすることで、PHスケールに沿って非常に均等に分布したPIマーカーの一連のPIマーカーを取得し、PI値の周りに良好なバッファリング能力と導電率を持つことができ、鋭い穴を開けることができます。PI決定へのもう1つのアプローチは、動員中の電流の監視です。これにより、既知のPIマーカーの助けを借りて、PI/電流グラフでシステムを校正できます。PI決定における落とし穴と一般的なエラーについては、ここでレビューされ、PI推定でそのようなエラーを最小化するためのガイドラインが与えられます。

Different ways of determining isoelectric points (pI) of proteins in capillary isoelectric focusing are reviewed here. Due to the impossibility of direct pH measurements in the liquid phase, such assessments have to rely on the use of pI markers. Different types of pI markers have been described: dyes, fluorescently labelled peptides, sets of proteins of known pI values. It appears that, perhaps, the best system is a set of 16 synthetic peptides, trimers to hexamers, made to contain each a Trp residue for easy detection at 280 nm. By a careful blend of acidic (Asp, Glu), mildly basic, with pK around neutrality (His), and basic (Lys, Arg) amino acids, it is possible to obtain a series of pI markers with pI values quite evenly distributed along the pH scale, possessing good buffering capacity and conductivity around their pI values and thus focusing as sharp peaks. Another approach to pI determination is the monitoring of the current during mobilization: this allows, with the aid of known pI markers, to calibrate the system with a pI/current graph. Pitfalls and common errors in pI determinations are reviewed here and guidelines given for minimizing such errors in pI estimation.