ハイロードQセファロースカラムを使用した高速タンパク質液体クロマトグラフィーによるプラスミドDNAの大規模精製

プラスミドDNAの大規模な精製は、ハイロードQセファロースカラムで高速タンパク質液体クロマトグラフィーを使用して達成されました。この方法により、単純なアルカリ性溶解手順によって調製された粗プラスミドDNAから、5時間未満で純粋なDNAまでプラスミドの精製が可能になります。CSCL勾配遠心分離または高圧液体クロマトグラフィーの前述のプラスミド精製法とは対照的に、この方法では危険または高価な化学物質の使用を必要としません。この手順を使用して、3〜15 kbのサイズが異なる100を超えるプラスミドが精製されています。モノQセファロースカラムは、最初に8.0 kbよりも小さいプラスミドを精製するために使用されました。ただし、8 kbを超えるプラスミドでは、ハイロードQセファロースカラムがより効果的であることが判明しました。モノQカラムに8 kBを超えるプラスミドの負荷は、高い背圧をもたらし、プラスミドDNAをカラムから溶出できませんでした。したがって、日常の精製のために、ハイロードQセファロースカラムを利用します。この方法によって精製されたプラスミドは、CSCL密度勾配遠心分離によって精製されたプラスミドのものと同様の哺乳類細胞の純度、収率、トランスフェクション効率を持っていました。

The large-scale purification of plasmid DNA was achieved using fast protein liquid chromatography on a Hi-Load Q Sepharose column. This method allows for the purification of plasmids starting from crude plasmid DNA, prepared by a simple alkaline lysis procedure, to pure DNA in less than 5 h. In contrast to the previously described plasmid purification methods of CsCl gradient centrifugation or high-pressure liquid chromatography, this method does not require the use of any hazardous or expensive chemicals. More than 100 plasmids varying in size from 3 to 15 kb have been purified using this procedure. A Mono Q Sepharose column was initially used to purify plasmids smaller than 8.0 kb; however, a Hi-Load Q Sepharose column proved more effective with plasmids larger than 8 kb. The loading of plasmids larger than 8 kb on the Mono Q column resulted in a high back pressure and the plasmid DNA could not be eluted from the column. Thus, for routine purification we utilize the Hi-Load Q Sepharose column. Plasmids purified by this method had purity, yield, and transfection efficiency in mammalian cells similar to those of plasmids purified by CsCl density gradient centrifugation.