リソソーム関連膜タンパク質1（LAMP1）TGNから初期エンドソームへの直接交通機関

ゴルジ体から出てから新しく合成されたリソソーム膜タンパク質がそれに続く正確な人身売買ルートは不明です。これらのイベントを研究するために、アビジンに融合した2つのチロシン硫酸化モチーフを含む内腔ドメインを持つ新しいキメラ（YAL）、およびリソソーム関連膜タンパク質1（LAMP1）の膜貫通および細胞質ドメインを作成しました。新しく合成されたタンパク質は、トランスゴルジネットワーク（TGN）からリソソーム（1/2）の15〜20分後の約30分後にT（1/2））に急速に通過しました。しかし、標識されたキメラは、わずか5分間エンドサイトーシス化されたビオチン化プローブによって捕獲され、エンドサイトーシス経路への初期侵入部位が初期エンドソームであることを示しています。TGNからのYALの輸出が必要であり、ビオチン化試薬のエンドサイトーシスが必要であり、チェイスから2時間以内に本質的に定量的であり、すべての分子が同一の経路をたどっていたことを示唆しています。細胞表面を介してYALの人身売買の証拠はありませんでした。TGN由来の小胞と5分のエンドソームの融合はin vitroで再現される可能性がありますが、後期エンドソームもリソソームもアクセプターコンパートメントとして機能することはできません。これは、以前の結論に反して、すべてではないにしても、すべてではないにしても、LAMP1がTGNから早期エンドソームまでのすべてではないにしても、後期エンドソームおよびリソソームに分娩する前に、ほとんどの場合、ほとんどの人がlamp1であることを示唆しています。

The precise trafficking routes followed by newly synthesized lysosomal membrane proteins after exit from the Golgi are unclear. To study these events we created a novel chimera (YAL) having a lumenal domain comprising two tyrosine sulfation motifs fused to avidin, and the transmembrane and cytoplasmic domains of lysosome associated membrane protein 1 (Lamp1). The newly synthesized protein rapidly transited from the trans- Golgi Network (TGN) to lysosomes (t(1/2) approximately 30 min after a lag of 15-20 min). However, labeled chimera was captured by biotinylated probes endocytosed for only 5 min, indicating that the initial site of entry into the endocytic pathway was early endosomes. Capture required export of YAL from the TGN, and endocytosis of the biotinylated reagent, and was essentially quantitative within 2 h of chase, suggesting that all molecules were following an identical route. There was no evidence of YAL trafficking via the cell surface. Fusion of TGN-derived vesicles with 5 min endosomes could be recapitulated in vitro, but neither late endosomes nor lysosomes could serve as acceptor compartments. This suggests that contrary to previous conclusions, most if not all newly synthesized Lamp1 traffics from the TGN to early endosomes prior to delivery to late endosomes and lysosomes.