抗CD3および抗CD28抗体と結合した磁気ビーズを使用したヒトT細胞膨張Ex vivoの最適化

T細胞受容体の関与とそれに伴う共刺激シグナルは、個々のT細胞の活性化と機能的潜在力のレベルを制御します。著者らは、以前に、抗CD3および抗CD28モノクローナル抗体を使用して、スーパーパラマグネティックビーズ（Xcyte dynabeads）に共有結合する培養エクスビボで活性化および拡大する新しい技術を開発しました。この研究では、培養物にN-アセチルL-システイン（NAC）を添加すると、細胞機能が低下することなく、ヒト末梢血単核細胞からのT細胞の拡大が著しく増加しました。NACは、T細胞分裂の割合を増加させ、アポトーシスを減らし、培養物の抗原特異的記憶T細胞の割合を増加させました。培養開始時のビーズとT細胞に対する比率をT細胞（1：10-10：1）と変化させる効果も評価されました。ポリクローナルT細胞は、テストされたすべてのビーズとT細胞の比率で拡張されました（範囲1：10-10：1）。高いビーズとT細胞の比率（5：1および10：1）が削除された一方、低比（1:10および1：5）は、サイトメガロウイルス、エプスタインバーウイルス、およびインフルエンザウイルス抗原に向けられた記憶T細胞を保存しました。培養中にさらに抗CD3/抗CD28ビーズを追加すると、T細胞がさらに拡大しました。また、実験により、ビーズの抗CD28抗体の量に対する抗CD3抗体の量を減らすことで、抗原特異的T細胞の増殖が促進されることが明らかになりました。要約すると、これらのデータは、抗CD3/抗CD28ビーズのT細胞刺激効果をさらに操作して抗原特異的記憶T細胞の拡大を制御できることを示しており、抗原特異的T細胞を迅速に拡大するために使用できることを示しています。潜在的な臨床応用の場合。

T-cell receptor engagement and accompanying costimulatory signals control the level of activation and functional potential of individual T cells. The authors previously developed a novel technology in which human T cells are activated and expanded in culture ex vivo using anti-CD3 and anti-CD28 monoclonal antibodies covalently linked to superparamagnetic beads (Xcyte Dynabeads). In this study the addition of N-acetyl L-cysteine (NAC) to the cultures markedly increased the expansion of T cells from human peripheral blood mononuclear cells without diminishing cell function. NAC increased the rate of T-cell division, reduced apoptosis, and increased the percentage of antigen-specific memory T cells in the cultures. The effect of varying the ratio of beads to T cells (1:10-10:1) at culture initiation was also evaluated. Polyclonal T cells were expanded at all bead-to-T cell ratios tested (range 1:10-10:1). While high bead-to-T cell ratios (5:1 and 10:1) deleted, low ratios (1:10 and 1:5) preserved memory T cells directed against cytomegalovirus, Epstein-Barr virus, and influenza virus antigens. Adding more anti-CD3/anti-CD28 beads during the culture led to further expansion of T cells. Experiments also revealed that reducing the amount of anti-CD3 antibodies relative to the amount of anti-CD28 antibodies on the beads favored the proliferation of antigen-specific T cells. In summary, these data indicate that T cell-stimulating effects of anti-CD3/anti-CD28 beads can be further manipulated to control the expansion of antigen-specific memory T cells and can be used to rapidly expand antigen-specific T cells ex vivo for potential clinical applications.