異なるエンドサイトーシス経路によるCD4の糖リン脂質アンカー型および膜貫通型のエンドサイトーシス

CD4受容体のグリコホスファチジルイノシトール（GPI）は、CD4の細胞外ドメインを、GPI-ANCRERITINGの付着信号を含む減衰加速因子（DAF）に融合することにより構築されました。GPI結合CD4（CD4DAF）の内在化は、[125i] GP120と抗CD4抗体の両方を使用して、膜貫通CD4の内在化と比較されました。膜貫通CD4はトランスフェクトCHO細胞で急速にエンドサイトーシスされているが、CD4DAFは約3倍遅い速度で内在化されていることを示しています。免疫電子顕微鏡検査は、膜貫通CD4がクラスリンコーティングされた小胞を介してエンドサイトーシス化されているのに対し、CD4DAFは原形質膜の非コーティングされた微量吸入物を含む代替経路によって細胞に入ることを示唆しています。内在化後、CD4DAFはプリマキンではないコンパートメントを介してリサイクルしますが、膜貫通CD4のリサイクルはプリマキンによって阻害され、2つの受容体が初期エンドソームの異なる集団からリサイクルできることを示唆しています。リソソーム膜タンパク質に対する抗体とのCD4DAFとCD4の両方の共局在は、2つのエンドサイトーシス経路が収束する可能性があることを示唆しています。

A glycophosphatidylinositol (GPI)-anchored form of the CD4 receptor was constructed by fusing the extracellular domain of CD4 to the COOH-terminus of decay accelerating factor (DAF), containing a signal for GPI-anchor attachment. The internalization of GPI-linked CD4 (CD4DAF) was compared to that of transmembrane CD4 using both [125I]gp120 and anti-CD4 antibodies. We show that transmembrane CD4 is rapidly endocytosed in transfected CHO cells, while CD4DAF is internalized at a rate approximately 3-fold slower. Immunoelectron microscopy suggests that whereas transmembrane CD4 is endocytosed via clathrin-coated vesicles, CD4DAF enters cells by an alternative pathway involving non-coated microinvaginations of the plasma membrane. Following internalization CD4DAF recycles through a primaquine-insensitive compartment, whereas the recycling of transmembrane CD4 is inhibited by primaquine, suggesting that the two receptors may recycle from distinct populations of early endosomes. Colocalization of both CD4DAF and CD4 with an antibody against a lysosomal membrane protein suggests that the two endocytic pathways may converge.