組換えモルモットCCL5（RANTES）は、肺胞および腹膜マクロファージのサイトカイン産生を特異的に調節します

CC ケモカイン リガンド 5 (CCL5; 活性化が調節され、正常な T が発現および分泌される) は、白血球を動員して活性化することが知られています。しかし、その後の微生物病原体との遭遇に対する宿主細胞の反応を変化させるその役割についてはほとんど研究されていない。組換えモルモット (rgp)CCL5 を調製し、rgpCCL5 単独で刺激した細胞、またはリポ多糖 (LPS) 刺激前に rgpCCL5 に曝露した細胞におけるサイトカインおよびケモカインの mRNA 発現を測定することにより、腹膜および肺胞マクロファージの活性化に対するその影響を調べました。モルモット腫瘍壊死因子アルファ (TNF-アルファ)、インターロイキン (IL)-1 ベータ、CCL2 (単球化学誘引物質タンパク質-1)、および CXC ケモカイン リガンド 8 (IL-8) の mRNA レベルを、逆転写とその後の実際の転写によって分析しました。SYBR Green を使用した - 時間ポリメラーゼ連鎖反応分析。生物活性 TNF-α タンパク質濃度は、L929 バイオアッセイを使用して測定しました。どちらのマクロファージ集団も、肺胞マクロファージの CCL2 を除く、rgpCCL5 で刺激すると、すべての遺伝子と TNF-α タンパク質レベルの有意な増強を示しました。腹膜または肺胞のマクロファージをrgpCCL5で2時間前処理し、その後低濃度のLPSに曝露すると、LPS単独と比較して6時間の時点でサイトカインおよびケモカインのmRNAレベルの減少が明らかでした。タンパク質レベルでは、LPS 単独と比較して、CCL5 で前処理した細胞では 6 時間の時点で TNF-α タンパク質の減少が見られました。これらの結果は、走化性特性に加えてマクロファージの活性化におけるCCL5の役割をさらに裏付けており、マクロファージによる炎症誘発性サイトカインの産生を調節することによってモルモットのLPSに対する炎症反応を調節する役割を示唆している。

The CC chemokine ligand 5 (CCL5; regulated on activation, normal T expressed and secreted) is known to recruit and activate leukocytes; however, its role in altering the responses of host cells to a subsequent encounter with a microbial pathogen has rarely been studied. Recombinant guinea pig (rgp)CCL5 was prepared, and its influence on peritoneal and alveolar macrophage activation was examined by measuring cytokine and chemokine mRNA expression in cells stimulated with rgpCCL5 alone or exposed to rgpCCL5 prior to lipopolysaccharide (LPS) stimulation. Levels of mRNA for guinea pig tumor necrosis factor alpha (TNF-alpha), interleukin (IL)-1beta, CCL2 (monocyte chemoattractant protein-1), and CXC chemokine ligand 8 (IL-8) were analyzed by reverse transcription followed by real-time polymerase chain reaction analysis using SYBR Green. Bioactive TNF-alpha protein concentration was measured using the L929 bioassay. Both macrophage populations displayed significant enhancement of all the genes and TNF-alpha protein levels when stimulated with rgpCCL5, except for CCL2 in alveolar macrophages. When peritoneal or alveolar macrophages were pretreated with rgpCCL5 for 2 h and then exposed to low concentrations of LPS, diminished cytokine and chemokine mRNA levels were apparent at 6 h compared with LPS alone. At the protein level, there was a reduction in TNF-alpha protein at 6 h in the CCL5-pretreated cells compared with LPS alone. These results further support a role for CCL5 in macrophage activation in addition to chemotactic properties and suggest a role in regulating the inflammatory response to LPS in the guinea pig by modulating the production of proinflammatory cytokines by macrophages.