タンパク質の表面疎水性のスペクトロフルオリメトリック評価

アポーラ蛍光色素の平衡結合1-アニリノナフタレン-8-スルホン酸（ANS）は、バクテリオリオドプシン、BSA、鶏卵リゾチーム、卵ドトロフィン、ブタサマトトロフィン（PST）、およびウシ膵臓リブンクレアーゼを使用した標準的なリブンクレアーゼを使用したことがありました。分析をプロットします。ANS結合部位（KA）の平均的な関連性定数に基づいて、タンパク質は、RNAASEより大きいLysozymeよりも大きいOvalbuminよりも大きいBSAよりも大きいBSAよりも大きいBSAより大きいバクテリオリオロドプシンとして、表面疎水性の順にランク付けされる可能性があります。タンパク質ANS結合部位の数は、それぞれ54、10、3、1、2、および1として決定されました。これらのタンパク質の表面疎水性のANSベースの評価は、一般に、アミノ酸配列に基づく平均疎水性と一致していました[Bigelow（1967）J。Theor。Biol。16、187-211]、PSTおよびOvalbuminの結果を除きます。タンパク質は、逆相H.P.L.Cによって分析されました。C1およびC8列を使用します。ANSと逆相H.P.L.Cの間に有意な相関はありませんでした。H.P.L.C.によって得られた結果との疎水性の評価使用されている列に依存すること。表面疎水性のANSベースの測定は、溶液中の全体的な3次元構造を反映するなど、タンパク質を評価するための最も適切な手段であると思われます。

The equilibrium binding of the apolar fluorescent dye 1-anilinonaphthalene-8-sulphonate (ANS) to bacteriorhodopsin, BSA, chicken egg lysozyme, ovalbumin, porcine somatotrophin (PST) and bovine pancreatic ribonuclease (RNAase) was quantitatively evaluated using Scatchard- and Klotz-plot analyses. On the basis of the average association constant for ANS binding sites (Ka), the proteins could be ranked in order of surface hydrophobicity as: Bacteriorhodopsin greater than BSA greater than ovalbumin greater than PST greater than lysozyme greater than RNAase. The number of protein-ANS binding sites was determined as 54, 10, 3, 1, 2 and 1 respectively. The ANS-based assessment of the surface hydrophobicity of these proteins was generally in agreement with the average hydrophobicity based on amino acid sequence [Bigelow (1967) J. Theor. Biol. 16, 187-211], except for results with PST and ovalbumin. The proteins were also analysed by reversed-phase h.p.l.c. using C1 and C8 columns. There was no significant correlation between ANS and reversed-phase-h.p.l.c. assessment of hydrophobicity, with the results obtained by h.p.l.c. being dependent upon the column used. ANS-based measurement of surface hydrophobicity appears to be the most appropriate means for assessing proteins such as to reflect their overall three-dimensional structure in solution.