原発性マウスケラチノサイト培養

マウス表皮角化細胞は、伝統的にin vitroで成長するのが困難でした。この章では、長期培養のために、単一の新生児マウスの子犬から表皮角化細胞を分離する方法を紹介します。私たちが説明するプロトコルは、トランスジェニックまたはノックアウトマウスから採取された細胞の分離と分析に特に役立ちます。マウスコラーゲンIVでコーティングされた培養皿とともに、サプリメントされた線維芽細胞条件の培地を使用して、複数の通路のためにこれらの気難しい細胞を確立およびサブカルチ化する方法を説明します。培養細胞の表皮分化の後期段階のマーカーの発現を誘導する方法と、必要に応じてマウスから除去されたサイトで培養用のマウス皮全体を出荷する方法について説明します。この章には、液体窒素上の貯蔵期間後に高い細胞生存率を保証する凍結保存の方法も含まれています。ここで詳細に説明されている技術は、表皮欠陥を持つトランスジェニックまたはヌルマウスを現在生成している研究者にとって興味深いものでなければなりません。

Mouse epidermal keratinocytes have traditionally been difficult to grow in vitro. In this chapter, we present a method for isolating epidermal keratinocytes from a single, newborn mouse pup for long-term culture. The protocols we describe will be especially useful for the isolation and analysis of cells harvested from transgenic or knockout mice. We explain how to use a supplemented fibroblast-conditioned medium, along with mouse collagen IV-coated culture dishes, to establish and subculture these fastidious cells for multiple passages. We describe how to induce expression of markers of the late stages of epidermal differentiation in cultured cells and how to ship whole mouse skins for culture at a site removed from the mice, should it be required. This chapter also contains a method of cryopreservation that ensures high cell viability after periods of storage over liquid nitrogen. The techniques described here in detail should be of interest to investigators currently producing transgenic or null mice with epidermal defects.