ホルマリン固定パラフィン包埋組織にPERCPの赤い蛍光を使用した新しい免疫蛍光法

汎用性のある組織染色法である免疫蛍光剤は、その明確なコントラストと正の信号の正確な定量化により、生物医学研究で使用されています。しかし、臨床診断への応用は限られています。主要な障害は、ホルマリン固定のパラフィン包埋組織切片（パラフィン切片）の高い蛍光背景です。パラフィン切片では、フルオレセインイソチオシアン酸（FITC）などの従来の蛍光色素のそれを重ねて、標的免疫蛍光の検出を防ぐセクションの強力で広範囲の蛍光が強調されています。バックグラウンドを回避するために、腫瘍反応性モノクローナル抗体を伴うヒト腫瘍切片の免疫染色のために、アルブミン色の色素、ペリジニンクロロフィルAタンパク質（PerCP）を選択しました。PERCPの赤い蛍光は、セクションの黄緑色の自己蛍光内の腫瘍領域を明確に区別しました。さらに、カウンター染色なしに組織の形態を同時に観察することが可能でした。この方法では、自己蛍光が対比染色として機能しました。PERCP染色画像強度相関（R2> 0.99）のデジタル定量化は、抽出されたPERCP量とよく相関し、画像の定量化の有用性を示しています。この新しい単純な免疫蛍光法は、がんを含む広範囲の状態の病理学的診断に適用できると結論付けています。

Immunofluorostaining, a versatile tissue staining method, is used in biomedical research because of its clear contrast and precise quantification of positive signals. However, its application in clinical diagnosis has been limited. A major obstacle is high fluorescent background of formalin-fixed, paraffin-embedded tissue sections (paraffin sections). On paraffin sections, strong and broad fluorescence of the section overlapping that of conventional fluorescent dyes such as fluorescein isothiocyanate (FITC) prevents detection of target immunofluorescence. To circumvent the background, we selected an albuminous dye, peridinin chlorophyll a protein (PerCP), for immunostaining of human tumor sections with tumor-reactive monoclonal antibodies. Red fluorescence of PerCP clearly distinguished the tumor region within the yellow-green autofluorescence of the section. Furthermore, it was possible to observe tissue morphology simultaneously without any counterstaining; autofluorescence served as counterstaining in this method. Digital quantification of PerCP-stained image intensity correlated (r2>0.99) well with extracted PerCP amount, indicating the usefulness of image quantification. We conclude that this new and simple immunofluorostaining method can be applied to pathological diagnosis of a wide range of conditions, including cancer.