馬とネコのIL-18発現構築物によって生成されたインターロイキン-18（IL-18）の生物活性と分泌

インターロイキン18（IL-18）は、免疫能のある細胞におけるIFNGAMMA、顆粒球単球コロニー刺激因子（GM-CSF）、TNFALPHAおよびIL-1を誘導できるサイトカインです。Pro-IL-18、成熟IL-18、およびIL-18を発現する馬およびネコのプラスミドベクターは、ヒトIL-1BETA受容体拮抗薬タンパク質（ILRAP）のILRAP-IL-18からの合成シグナル配列に融合しました。これらのコンストラクトのin vitroタンパク質発現は、ウエスタンブロット分析によって比較されました。これらのデータは、ILRAP-IL-18タンパク質がトランスフェクトされた中国のハムスター卵巣（CHO）細胞から容易に分泌されることを実証しました。ヒトIL-18の単純なバイオアッセイは、最近、ヒト骨型KG-1細胞を使用して説明されました。これは、用量依存的にヒトIL-18に応答してヒトIFNGAMMAを産生します（Konishi et al。、1997）。このアッセイを使用して、CHO細胞のトランスフェクション産物における馬およびネコIL-18タンパク質の生物活性を実証しました。ILRAP-IL-18タンパク質の生物活性は、トランスフェクトCHO細胞の培養媒体で実証されました。これらのデータは、ILRAP-IL-18構造が、タンパク質の細胞分泌が重要なin vivoでの使用の可能性を示していることを意味します。

Interleukin 18 (IL-18) is a cytokine capable of induction of IFNgamma, granulocyte monocyte-colony stimulating factor (GM-CSF), TNFalpha and IL-1 in immunocompetent cells. Equine and feline plasmid vectors expressing pro-IL-18, mature IL-18 and IL-18 fused to a synthetic signal sequence from human IL-1beta receptor antagonist protein (ILRAP), ILRAP-IL-18, have been generated. In vitro protein expression of these constructs was compared by Western blot analysis. These data demonstrated that ILRAP-IL-18 protein was secreted readily from transfected chinese hamster ovary (CHO) cells. A simple bioassay for human IL-18 was recently described using human myelomonocytic KG-1 cells, which produce human IFNgamma in response to human IL-18 in a dose dependent manner (Konishi et al., 1997). We demonstrated bioactivity of equine and feline IL-18 protein in transfection products of CHO cells using this assay. Bioactivity of ILRAP-IL-18 protein was demonstrated in the culture medium of transfected CHO cells. These data imply that the ILRAP-IL-18 construct shows potential for use in vivo, where cell secretion of protein is crucial.