Discosoma sp Red蛍光タンパク質に由来するモノマー赤、オレンジ、黄色の蛍光タンパク質の改善

蛍光タンパク質は遺伝的にエンコードされており、生物学とバイオテクノロジーにおいて容易に画像化された記者が不可欠です。蛍光タンパク質への融合によってタンパク質がタグ付けされると、蛍光タンパク質間の相互作用は、ターゲティングまたは機能を望ましくない可能性があります。残念ながら、これまで報告されている野生型の黄色から赤の蛍光タンパク質はすべて、四量体であり、しばしば毒性または破壊的です。最初の真のモノマーは、Discosoma sp。に由来するMRFP1でした。指示された進化により、蛍光タンパク質「DSRED」を最初に「DSRED」して、成熟の速度を上げ、次に各サブユニットインターフェースを破壊しながら蛍光を回復し、累積的に33の置換が必要でした。MRFP1はすでに広く有用であることが証明されていますが、いくつかのプロパティは改善を負担する可能性があり、より多くの色が歓迎されます。次世代のモノマーを報告します。最新の赤いバージョンはより完全に成熟し、N末端融合に対してより耐性があり、MRFP1よりも10倍以上の光安定性があります。黄色オレンジから赤オレンジまでの識別可能な色相を持つ3つのモノマーは、量子効率が高いです。

Fluorescent proteins are genetically encoded, easily imaged reporters crucial in biology and biotechnology. When a protein is tagged by fusion to a fluorescent protein, interactions between fluorescent proteins can undesirably disturb targeting or function. Unfortunately, all wild-type yellow-to-red fluorescent proteins reported so far are obligately tetrameric and often toxic or disruptive. The first true monomer was mRFP1, derived from the Discosoma sp. fluorescent protein "DsRed" by directed evolution first to increase the speed of maturation, then to break each subunit interface while restoring fluorescence, which cumulatively required 33 substitutions. Although mRFP1 has already proven widely useful, several properties could bear improvement and more colors would be welcome. We report the next generation of monomers. The latest red version matures more completely, is more tolerant of N-terminal fusions and is over tenfold more photostable than mRFP1. Three monomers with distinguishable hues from yellow-orange to red-orange have higher quantum efficiencies.