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in vitroの肥大化可能性と10個の近交系マウス株（C57BL/6J、C57BL/10、C57BL/10.D2/NEWSN、C57BL/10-THY1.1、C57BL/10.BR/SN、C3H/HE、RFM/MS、STS/A、BALB/C-NUおよびC.B-17/ICR）、および胚移植後（ET）後の凍結融解で融解したin vitro施肥（IVF）胚の生存率。7つの株では、修飾されたKrebs-Ringerの重炭酸塩溶液（TYH培地）と比較して、修飾されたヒト卵管液（MHTF）で肥料が有意に大きかった。TYH媒体は、4つの株の受精をほとんど支持しませんでした。IVF胚の80％以上が、カリウム強化シンプレックス最適化培地（KSOM）で120時間増加したIVF胚の80％以上を発症しました。TYH培地のC57BL/6JとBALB/C-NU配偶子の間の相互受精により、精子の欠陥によりBALB/C-NUの肥料が不十分になりました。容量化およびパーコール洗浄中のウシ血清アルブミンと精子の濃度の増加は、受精に大きな影響を与えませんでした。Tyh媒体ではなくMHTFは、容量化媒体に関係なく、Zona PellucidaへのBALB/C-NUの精子の浸透をサポートしました。急速に凍結融解したin vitro受精胚を2細胞段階で代理母親に移しました。未凍結のコントロールのそれと比較して、急速な凍結は、C57BL/10.D2/NewsNマウスを除き、胎児の発達に有意な影響を与えませんでした。これらの結果は、MHTF培地が近交系マウスのIVFに関して優れており、KSOMが近交系マウスのin vitro施肥胚発生を適切にサポートしていることを示唆しています。データはまた、IVF後の胚胚の急速な凍結が、近交系マウスの凍結保存と胚バンキング、および遺伝子組み換えマウスの生産に適していることを示しています。
in vitroの肥大化可能性と10個の近交系マウス株（C57BL/6J、C57BL/10、C57BL/10.D2/NEWSN、C57BL/10-THY1.1、C57BL/10.BR/SN、C3H/HE、RFM/MS、STS/A、BALB/C-NUおよびC.B-17/ICR）、および胚移植後（ET）後の凍結融解で融解したin vitro施肥（IVF）胚の生存率。7つの株では、修飾されたKrebs-Ringerの重炭酸塩溶液（TYH培地）と比較して、修飾されたヒト卵管液（MHTF）で肥料が有意に大きかった。TYH媒体は、4つの株の受精をほとんど支持しませんでした。IVF胚の80％以上が、カリウム強化シンプレックス最適化培地（KSOM）で120時間増加したIVF胚の80％以上を発症しました。TYH培地のC57BL/6JとBALB/C-NU配偶子の間の相互受精により、精子の欠陥によりBALB/C-NUの肥料が不十分になりました。容量化およびパーコール洗浄中のウシ血清アルブミンと精子の濃度の増加は、受精に大きな影響を与えませんでした。Tyh媒体ではなくMHTFは、容量化媒体に関係なく、Zona PellucidaへのBALB/C-NUの精子の浸透をサポートしました。急速に凍結融解したin vitro受精胚を2細胞段階で代理母親に移しました。未凍結のコントロールのそれと比較して、急速な凍結は、C57BL/10.D2/NewsNマウスを除き、胎児の発達に有意な影響を与えませんでした。これらの結果は、MHTF培地が近交系マウスのIVFに関して優れており、KSOMが近交系マウスのin vitro施肥胚発生を適切にサポートしていることを示唆しています。データはまた、IVF後の胚胚の急速な凍結が、近交系マウスの凍結保存と胚バンキング、および遺伝子組み換えマウスの生産に適していることを示しています。
We examined in vitro fertilizability and development of 10 inbred mouse strains (C57BL/6J, C57BL/10, C57BL/10.D2/newSn, C57BL/10-Thy1.1, C57BL/10.Br/Sn, C3H/He, RFM/Ms, STS/A, BALB/c-nu and C.B-17/Icr), and the viability of frozen-thawed in vitro fertilized (IVF) embryos after embryo transfer (ET). In seven strains, fertilizability was significantly greater in modified human tubal fluid (mHTF) compared with modified Krebs-Ringer's bicarbonate solution (TYH medium). The TYH medium supported almost no fertilization in four strains. More than 80% of IVF embryos developed to the blastocyst stage by 120 h in potassium-enhanced simplex optimization medium (KSOM). Reciprocal fertilization between C57BL/6J and BALB/c-nu gametes in TYH medium yielded poor fertilization o f BALB/c-nu due to spermatozoal deficiencies. Increased concentrations of bovine serum albumin and spermatozoa during capacitation and Percoll washing did not drastically affect fertilization. The mHTF, but not TYH medium, supported BALB/c-nu spermatozoa penetration into the zona pellucida irrespective of capacitation media. In vitro fertilized embryos frozen-thawed rapidly were transferred to surrogate mothers at the two-cell stage. Compared with that of unfrozen controls, rapid freezing had no significant effect on fetus development except in C57BL/10.D2/newSn mice. These results suggest that mHTF medium is superior with respect to IVF of inbred mice, and that KSOM adequately supports in vitro fertilized embryo development in inbred mice. The data also indicate that rapid freezing of pronucleate embryos following IVF is suitable for cryopreservation and embryo banking of inbred mice and for the production of genetically modified mice.
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