ホルボール12-ミリステート13-アセテートは、膠芽腫細胞におけるプロテインキナーゼCDELTA/C-SRC経路を介して表皮成長因子受容体トランス活性化を誘導します

表皮成長因子受容体（EGFR）とプロテインキナーゼC（PKC）の両方が、膠芽腫侵襲的成長に重要な役割を果たします。ただし、EGFRとPKCの間の相互作用は、膠芽腫ではあまり特徴付けられていません。EGFによる治療は、膠芽腫細胞株（U-1242 mgおよびU-87 mg）でのTyr（845）、Tyr（992）、Tyr（1068）、およびTyr（1045）でのEGFRの世界的なリン酸化を刺激しました。興味深いことに、ホルボール12-ミリステート13-アセテート（PMA）は、2つの膠芽腫細胞株のTyr（1068）でのみEGFRのリン酸化を刺激しました。Tyr（1068）でのEGFRのリン酸化は、ホルボールエステルで処理した正常なヒト星状細胞では検出されませんでした。TYR（1068）のEGFRのPMA誘発性リン酸化は、PKC阻害剤であるビシンドリルマレイミド（BIM）とPKCDELTA特異的阻害剤であるロットランによってブロックされました。対照的に、古典的なPKCアイソザイムの阻害剤であるGO 6976は、PMA誘発EGFRリン酸化に影響を与えませんでした。さらに、PKCDELTAの小さな干渉RNA（siRNA）、C-SRCに対するsiRNA、および変異体C-SRC（S12C/S48A）およびC-SRC阻害剤（4-アミノ-5-（4-クロロフェニル）-7-（T-Butyl）Prugted Plig ablgimed [34-d] pliming [34-d] pligを使用した治療による遺伝子サイレンシングTyrでのリン酸化（1068）。PMAは、Srcのセリン/スレオニンのリン酸化を誘導し、BIMとロットラリンの両方によってブロックされました。AG 1478によるEGFRの阻害は、PMA誘発EGFR Tyr（1068）のリン酸化を有意に変化させず、EGF誘発性リン酸化を完全にブロックしました。MAPKリン酸化および膠芽腫細胞増殖に対するPMAの効果は、BIM、ロットラリン、MEK阻害剤U0126、およびPKCDELTAおよびC-SRC siRNAによって減少しました。まとめると、我々のデータは、PMAが膠芽腫のPKCDELTA/C-SRC経路を活性化することにより、EGFRをトランス活性化し、細胞の増殖を増加させることを示しています。

Both the epidermal growth factor receptor (EGFR) and protein kinase C (PKC) play important roles in glioblastoma invasive growth; however, the interaction between the EGFR and PKC is not well characterized in glioblastomas. Treatment with EGF stimulated global phosphorylation of the EGFR at Tyr(845), Tyr(992), Tyr(1068), and Tyr(1045) in glioblastoma cell lines (U-1242 MG and U-87 MG). Interestingly, phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) stimulated phosphorylation of the EGFR only at Tyr(1068) in the two glioblastoma cell lines. Phosphorylation of the EGFR at Tyr(1068) was not detected in normal human astrocytes treated with the phorbol ester. PMA-induced phosphorylation of the EGFR at Tyr(1068) was blocked by bisindolylmaleimide (BIM), a PKC inhibitor, and rottlerin, a PKCdelta-specific inhibitor. In contrast, Go 6976, an inhibitor of classical PKC isozymes, had no effect on PMA-induced EGFR phosphorylation. Furthermore, gene silencing with PKCdelta small interfering RNA (siRNA), siRNA against c-Src, and mutant c-Src(S12C/S48A) and treatment with a c-Src inhibitor (4-amino-5-(4-chlorophenyl)-7-(t-butyl) pyrazolo[3,4-d]pyrimidine) abrogated PMA-induced EGFR phosphorylation at Tyr(1068). PMA induced serine/threonine phosphorylation of Src, which was blocked by both BIM and rottlerin. Inhibition of the EGFR with AG 1478 did not significantly alter PMA-induced EGFR Tyr(1068) phosphorylation, but completely blocked EGF-induced phosphorylation of the EGFR. The effects of PMA on MAPK phosphorylation and glioblastoma cell proliferation were reduced by BIM, rottlerin, the MEK inhibitor U0126, and PKCdelta and c-Src siRNAs. Taken together, our data demonstrate that PMA transactivates the EGFR and increases cell proliferation by activating the PKCdelta/c-Src pathway in glioblastomas.