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大腸菌で過剰発現した精製された組換えムラ（enolpyruvyl-udp-glcnacシンターゼ）は、精製後に拘束されたUDP-Murnac（UDP-N-アセチルムラミン酸）のかなりの量のUDP-Murnac（UDP-N-アセチルムラミン酸）を有していました。UDP-Murnacは、ペプチドグリカン生合成の次の酵素であるMurbの産物です。Muraの約25％は、精製中に5段階の後にUDP-Murnacで複雑になり、それを削除するはずでした。ムラから分離されたUDP-Murnacは、質量分析、NMR分析、および本物のUDP-Murnacとの比較によって特定されました。その後の調査により、UDP-MURNACはムラにしっかりと結合し、K（D、UDP）（ - ）（MURNAC）= 0.94 +/- 0.04 MicroM、ANS（8-Anilino-1-NaphaleneSulfonate）を使用した蛍光滴定によって決定されることが示されました。外因性のフルオロフォア。UDP-Murnacの結合は、Muraの2番目の産物であるANSおよびリン酸塩と競合し、Muraを阻害しました。阻害パターンはやや曖昧であり、基質PEP（ホスホエノールピルビン酸）と競合する可能性があり、基質UDP-GLCNAC（UDP-N-アセチルグルコサミン）に関して競合または非競争力がありました。これらの結果は、フィードバック阻害を通じてペプチドグリカンのヌクレオチド前駆体の生合成を調節する上で、UDP-Murnacの可能性のある役割を示しています。以前の研究では、ムラへのUDP-Murnacの結合は生理学的に関連するほどタイトではないことが示されました。しかし、これはおそらくアッセイ条件のアーティファクトでした。
大腸菌で過剰発現した精製された組換えムラ（enolpyruvyl-udp-glcnacシンターゼ）は、精製後に拘束されたUDP-Murnac（UDP-N-アセチルムラミン酸）のかなりの量のUDP-Murnac（UDP-N-アセチルムラミン酸）を有していました。UDP-Murnacは、ペプチドグリカン生合成の次の酵素であるMurbの産物です。Muraの約25％は、精製中に5段階の後にUDP-Murnacで複雑になり、それを削除するはずでした。ムラから分離されたUDP-Murnacは、質量分析、NMR分析、および本物のUDP-Murnacとの比較によって特定されました。その後の調査により、UDP-MURNACはムラにしっかりと結合し、K（D、UDP）（ - ）（MURNAC）= 0.94 +/- 0.04 MicroM、ANS（8-Anilino-1-NaphaleneSulfonate）を使用した蛍光滴定によって決定されることが示されました。外因性のフルオロフォア。UDP-Murnacの結合は、Muraの2番目の産物であるANSおよびリン酸塩と競合し、Muraを阻害しました。阻害パターンはやや曖昧であり、基質PEP（ホスホエノールピルビン酸）と競合する可能性があり、基質UDP-GLCNAC（UDP-N-アセチルグルコサミン）に関して競合または非競争力がありました。これらの結果は、フィードバック阻害を通じてペプチドグリカンのヌクレオチド前駆体の生合成を調節する上で、UDP-Murnacの可能性のある役割を示しています。以前の研究では、ムラへのUDP-Murnacの結合は生理学的に関連するほどタイトではないことが示されました。しかし、これはおそらくアッセイ条件のアーティファクトでした。
Purified recombinant MurA (enolpyruvyl-UDP-GlcNAc synthase) overexpressed in Escherichia coli had significant amounts of UDP-MurNAc (UDP-N-acetylmuramic acid) bound after purification. UDP-MurNAc is the product of MurB, the next enzyme in peptidoglycan biosynthesis. About 25% of MurA was complexed with UDP-MurNAc after five steps during purification that should have removed it. UDP-MurNAc isolated from MurA was identified by mass spectrometry, NMR analysis, and comparison with authentic UDP-MurNAc. Subsequent investigation showed that UDP-MurNAc bound to MurA tightly, with K(d,UDP)(-)(MurNAc) = 0.94 +/- 0.04 microM, as determined by fluorescence titrations using ANS (8-anilino-1-naphthalenesulfonate) as an exogenous fluorophore. UDP-MurNAc binding was competitive with ANS and phosphate, the second product of MurA, and it inhibited MurA. The inhibition patterns were somewhat ambiguous, likely being competitive with the substrate PEP (phosphoenolpyruvate) and either competitive or noncompetitive with respect to the substrate UDP-GlcNAc (UDP-N-acetylglucosamine). These results indicate a possible role for UDP-MurNAc in regulating the biosynthesis of nucleotide precursors of peptidoglycan through feedback inhibition. Previous studies indicated that UDP-MurNAc binding to MurA was not tight enough to be physiologically relevant; however, this was likely an artifact of the assay conditions.
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