MyD88におけるTIRドメインの二量体化のペプチドを介した干渉は、nf- {kappa} bのインターロイキン-1依存性活性化を阻害します

ミエロイド分化因子88（MyD88）は、生来の宿主防御のいくつかのステップでインターロイキン（IL）-1およびToll様受容体によってトリガーされるシグナル伝達経路で重要な役割を果たします。このシグナル伝達経路の重要なイベントは、MyD88の二量体化によって表されます。これにより、IRAK-1やIRAK-4などの下流のキナーゼの動員が可能になります。本明細書では、異なる異なるTIRドメインのBBループ領域を模倣するEPTAペプチドを使用して、細胞なしおよびin vitroの実験的設定におけるMYD88ホモ二量体化におけるTOLL/IL-1受容体（TIR）ドメインの機能を調査しました。タンパク質。精製されたグルタチオンS-トランスフェラーゼ-MYD88 TIRまたは共免疫沈降実験を使用したプルダウンアッセイを使用することにより、MyD88およびIL-18RのTIRドメインに由来するEPTAペプチドが、孤立したホモディマー化を阻害するのに最も効果的であることがわかりました。TIRまたはフルレングスMYD88。さらに、MyD88 EPTA-ペプチドの細胞透過性類似体は、in vitro細胞系でのMyD88 TIRドメインのホモダイマイ化を阻害し、下流の転写因子NF-Kappabの活性化によってアッセイされるIL-1シグナル伝達を大幅に減少させることを実証しました。我々の結果は、MyD88のTIRドメインのBBループが、in vivoでのMyD88を介したシグナル伝達の特定の阻害の適切な標的であることを示しています。

Myeloid differentiation factor 88 (MyD88) plays a crucial role in the signaling pathways triggered by interleukin (IL)-1 and Toll-like receptors in several steps of innate host defense. A crucial event in this signaling pathway is represented by dimerization of MyD88, which allows the recruitment of downstream kinases like IRAK-1 and IRAK-4. Herein, we have investigated the function of the Toll/IL-1 receptor (TIR) domain in MyD88 homodimerization in cell-free and in vitro experimental settings by using epta-peptides that mimic the BB-loop region of the conserved TIR domain of different proteins. By using a pull-down assay with purified glutathione S-transferase-MyD88 TIR or co-immunoprecipitation experiments, we found that epta-peptides derived from the TIR domain of MyD88 and IL-18R are the most effective in inhibiting homodimerization with either the isolated TIR or full-length MyD88. Moreover, we demonstrated that a cell permeable analog of MyD88 epta-peptide inhibits homodimerization of MyD88 TIR domains in an in vitro cell system and significantly reduces IL-1 signaling, as assayed by activation of the downstream transcription factor NF-kappaB. Our results indicate that the BB-loop in TIR domain of MyD88 is a good target for specific inhibition of MyD88-mediated signaling in vivo.