トリコスタチンA（TSA）は、ヒト前立腺癌細胞株DU145を死の受容体リガンド治療に感染させる

ヒト前立腺癌細胞株DU145は、以前にTNFファミリーリガンドによる治療に耐性があることがわかっています。しかし、ヒストン脱アセチラーゼ阻害剤トリコスタチンA（TSA）と組み合わせたTRAIL、TNF-alphaおよび抗FAS抗体（AB）治療により、DU145の表現型が耐性に耐性から変換されました。TSAは15％の細胞死を誘導しましたが、TRAIL、TNF-alpha、および抗FAS ABによる同時治療により、それぞれ55％、70％、40％の細胞死が生じました。同時治療は、TSA誘発ヒストンアセチル化のレベルを上昇させませんでしたが、クロマチンからのアセチル化ヒストンの細胞ゾルへの放出を誘導しました。このリリースは、Z-VAD-FMKによって廃止されたため、カスパーゼに依存していました。さらに、TSAによる治療はカスパーゼ-9の活性化を誘発し、ミトコンドリアからのシトクロムCとSMAC/DIABLOの放出をもたらしました。TSAを介したアポトーシスにおけるカスパーゼ-9の役割をさらに調査するために、2つの異なるアプローチを使用しました。（1）カスパーゼ-9阻害剤Z-LEHD-FMKで前処理し、（2）細胞にカスパーゼ-9の優性陰性型をトランスフェクトしました。どちらのアプローチも同様の結果をもたらしました。細胞はTSAによる治療に耐性になりました。これらのデータは、TSAがミトコンドリア経路を介してその効果を媒介することを示しています。これは、Bcl-2の過剰発現を検査することで確認されました。これらのトランスフェクタントは、TSA治療に耐性がありました。まとめると、我々のデータは、DU145のTNFファミリーリガンドとTSAによる同時治療のみが、アポトーシスを誘導するのに十分なカスパーゼ活性をもたらすことを示しています。TSAとTNFファミリーのリガンドの組み合わせは、前立腺癌の治療の基礎となる可能性があります。

The human prostatic carcinoma cell line DU145 has previously been found to be resistant to treatment with TNF-family ligands. However, TRAIL, TNF-alpha and anti-Fas antibodies (Ab) treatment in combination with the histone deacetylase inhibitor Trichostatin A (TSA) converted the phenotype of DU145 from resistant to sensitive. TSA induced 15% cell death but simultaneous treatment with TRAIL, TNF-alpha and anti-Fas Ab resulted in 55%, 70% and 40% cell death, respectively. Simultaneous treatment did not increase the level of TSA-induced histone acetylation, but induced the release of acetylated histones from chromatin into the cytosol. This release was caspase dependent since it was abrogated by Z-VAD-fmk. In addition, treatment with TSA induced caspase-9 activation and resulted in the release of cytochrome c and Smac/DIABLO from mitochondria. To further investigate the role of caspase-9 in TSA-mediated apoptosis we used two different approaches: (1) cells were pretreated with the caspase-9 inhibitor Z-LEHD-fmk, and (2) cells were transfected with a dominant-negative form of caspase-9. Both approaches gave similar results: cells became resistant to treatment with TSA. These data indicate that TSA mediates its effect via the mitochondrial pathway. This was confirmed by examining DU145 overexpressing Bcl-2. These transfectants were resistant to TSA treatment. Taken together, our data shows that only simultaneous treatment with TNF-family ligands and TSA in DU145 resulted in caspase activity sufficient to induce apoptosis. The combination of TSA and TNF-family ligands could potentially be the basis for the treatment of prostate cancer.