タンパク質合成のためのSaccharomyces cerevisiae ADH2プロモーターの評価

Saccharomyces cerevisiae ADH2プロモーター（P（ADH2））は、グルコースの存在下で数百倍抑制されます。培地のグルコースが使い果たされると、転写が開始されます。したがって、プロモーターは、インデューサーを添加せずにS. cerevisiaeにおける組換え遺伝子発現の効果的な調節のために利用できます。プラスミドのコピー数と安定性の変動がない場合にこのプロモーターを評価するために、P（ADH2）-LACZカセットを酵母染色体に統合しました。プロモーターの抑制レベルと発現レベルに対する中程度の組成、グルコース濃度、培養時間の影響を調査しました。最大タンパク質活性は、1％グルコースを含む複雑なYPD培地で48時間成長した後に得られました。広く使用されているS. cerevisiae Gal1およびCup1プロモーターは、両方とも調節された遺伝子を発現する前に、誘導因子[ガラクトースと銅（II）イオン]を添加する必要があります。これら3つの異なるプロモーターの強度を、統合されたLACZ遺伝子の1つのコピーを制御している細胞について比較しました。ADH2プロモーターは、調査されたすべての誘導戦略よりも優れていました。

The Saccharomyces cerevisiae ADH2 promoter (P(ADH2)) is repressed several hundred-fold in the presence of glucose; transcription is initiated once the glucose in the medium is exhausted. The promoter can thus be utilized for effective regulation of recombinant gene expression in S. cerevisiae without the addition of an inducer. To evaluate this promoter in the absence of plasmid copy number and stability variations, the P(ADH2)-lacZ cassette was integrated into the yeast chromosomes. The effects of medium composition, glucose concentration and cultivation time on promoter derepression and expression level were investigated. Maximum protein activity was obtained after 48 h of growth in complex YPD medium containing 1% glucose. The widely used S. cerevisiae GAL1 and CUP1 promoters both require the addition of an inducer [galactose and copper(II) ion, respectively] before regulated genes will be expressed. The strengths of these three different promoters were compared for cells containing one copy of an integrated lacZ gene under their control. The ADH2 promoter was superior for all induction strategies investigated.