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Journal of clinical microbiology2005May01Vol.43issue(5)

歯周細菌性細菌の迅速に検出されるループ媒介等温増幅方式

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文献タイプ:
  • Journal Article
  • Research Support, Non-U.S. Gov't
概要
Abstract

新規の核酸増幅法であるループ媒介等温増幅(LAMP)は、主要な歯周病原体ポルフィロモナスgingivalis、Tannerella forsythia、およびTreponema denticolaの迅速な検出のために開発されました。LAMPメソッドは、4つの特別に設計されたプライマーのセットと鎖変位活性を備えたDNAポリメラーゼを使用して、等温条件下で高い特異性、効率、および速度を持つDNAを増幅します。この研究では、これらの細菌を検出するためにランプアッセイ用のプライマーを最初に設計し、これらのアッセイの特異性と感度を評価しました。これらの細菌のプライマーの特異性は、さまざまな口腔細菌とさまざまな反応時間を使用して検査されました。ループプライマーなしの60分間のランプ反応の検出限界が低いのは、P。gingivalisの1マイクログ/チューブ、T。Forsythiaで10 fg/チューブ、T。denticolaの1 ng/チューブでした。各細菌にループプライマーを添加すると、いくつかの大きさによる検出特異性と感度が改善されました。さらに、ランプアッセイは、臨床検体におけるこれらの歯周病原体の迅速な検出に適用され、結果を従来のPCR検出の結果と比較しました。ランプアッセイの結果は、従来のPCRアッセイの結果に対応していました。これらの結果は、ランプアッセイが非常に迅速で、非常に敏感な、特異的な方法であることを示しています。この方法は、歯周細菌の迅速な検出と歯周病の診断に非常に役立ちます。

新規の核酸増幅法であるループ媒介等温増幅(LAMP)は、主要な歯周病原体ポルフィロモナスgingivalis、Tannerella forsythia、およびTreponema denticolaの迅速な検出のために開発されました。LAMPメソッドは、4つの特別に設計されたプライマーのセットと鎖変位活性を備えたDNAポリメラーゼを使用して、等温条件下で高い特異性、効率、および速度を持つDNAを増幅します。この研究では、これらの細菌を検出するためにランプアッセイ用のプライマーを最初に設計し、これらのアッセイの特異性と感度を評価しました。これらの細菌のプライマーの特異性は、さまざまな口腔細菌とさまざまな反応時間を使用して検査されました。ループプライマーなしの60分間のランプ反応の検出限界が低いのは、P。gingivalisの1マイクログ/チューブ、T。Forsythiaで10 fg/チューブ、T。denticolaの1 ng/チューブでした。各細菌にループプライマーを添加すると、いくつかの大きさによる検出特異性と感度が改善されました。さらに、ランプアッセイは、臨床検体におけるこれらの歯周病原体の迅速な検出に適用され、結果を従来のPCR検出の結果と比較しました。ランプアッセイの結果は、従来のPCRアッセイの結果に対応していました。これらの結果は、ランプアッセイが非常に迅速で、非常に敏感な、特異的な方法であることを示しています。この方法は、歯周細菌の迅速な検出と歯周病の診断に非常に役立ちます。

Loop-mediated isothermal amplification (LAMP), a novel nucleic acid amplification method, was developed for the rapid detection of the major periodontal pathogens Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, and Treponema denticola. The LAMP method amplifies DNA with high specificity, efficiency, and rapidity under isothermal conditions using a set of four specially designed primers and a DNA polymerase with strand displacement activity. In this study, we initially designed the primers for LAMP assays to detect these bacteria and evaluated the specificity and sensitivity of these assays. The specificities of the primers for these bacteria were examined using various oral bacteria and various reaction times. The lower detection limits of the 60-min LAMP reaction without loop primers were 1 microg/tube for P. gingivalis, 10 fg/tube for T. forsythia, and 1 ng/tube for T. denticola. Addition of the loop primers for each bacterium improved the detection specificities and sensitivities by several magnitudes. Furthermore, LAMP assays were applied to the rapid detection of these periodontal pathogens in clinical specimens, and the results were compared with those of conventional PCR detection. The results of the LAMP assays corresponded to those of conventional PCR assays. These results indicate that the LAMP assay is an extremely rapid, highly sensitive, specific method. This method is very useful for the rapid detection of periodontopathic bacteria and the diagnosis of periodontal disease.

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