ヒト免疫不全ウイルス1型複製に対するポリプリン路（PPT）変異の影響：完全に無作為化されたPPTを持つウイルスは、感染性が低いことを保持します

in vitroアッセイで以前にテストしたポリプリントラクト（PPT）変異をウイルスクローンNL4-3KFSDELTA NEFに導入しました。各変異体は、単一ラウンドの感染性とビリオン産生についてテストされました。すべてのPPT変異は複製に影響を及ぼしました。しかし、5 '末端の変異は、PPT配列の3'末端の突然変異よりも感染性への影響が少ないように見えました。不思議なことに、PPT配列全体が無作為化された突然変異（PPTSUB）は、ガラクトシダーゼインジケーターアッセイの多核活性化において、野生型（WT）の感染性の12％を保持しました。これらの感染症の上清には、p24抗原の存在によって証明されるように、ウイルス粒子が含まれていました。PPTSUB感染後の2本の端子繰り返し（2-LTR）サークル接合分析により、変異体が通常の接合部の高い割合を形成できることが明らかになりました。リアルタイムPCRを使用した2-LTR円の定量化により、PPTSUB変異体に感染した細胞からの2-LTR円の数が、WTウイルスに感染した細胞からの2-LTR円を超える3.5 logであることが明らかになりました。PPTSUB感染からの子孫のビリオンがさらに複製のラウンドを受ける可能性があるかどうかを判断するために、PPTSUB変異を複製能力のあるウイルスに導入しました。我々の結果は、変異ウイルスが複製できること、そして子孫ビリオンの感染性が各通過とともに増加し、WT PPTシーケンスに迅速に戻ることを示しています。一緒に、これらの実験では、PPTの3 '末端がプラス鎖プライミングにとって重要であり、PPTを完全に欠くウイルスが低レベルで複製できることを確認しています。

We introduced polypurine tract (PPT) mutations, which we had previously tested in an in vitro assay, into the viral clone NL4-3KFSdelta nef. Each mutant was tested for single-round infectivity and virion production. All of the PPT mutations had an effect on replication; however, mutation of the 5' end appeared to have less of an effect on infectivity than mutation of the 3' end of the PPT sequence. Curiously, a mutation in which the entire PPT sequence was randomized (PPTSUB) retained 12% of the infectivity of the wild type (WT) in a multinuclear activation of galactosidase indicator assay. Supernatants from these infections contained viral particles, as evidenced by the presence of p24 antigen. Two-long terminal repeat (2-LTR) circle junction analysis following PPTSUB infection revealed that the mutant could form a high percentage of normal junctions. Quantification of the 2-LTR circles using real-time PCR revealed that number of 2-LTR circles from cells infected with the PPTSUB mutant was 3.5 logs greater than 2-LTR circles from cells infected with WT virus. To determine whether the progeny virions from a PPTSUB infection could undergo further rounds of replication, we introduced the PPTSUB mutation into a replication-competent virus. Our results show that the mutant virus is able to replicate and that the infectivity of the progeny virions increases with each passage, quickly reverting to a WT PPT sequence. Together, these experiments confirm that the 3' end of the PPT is important for plus-strand priming and that a virus that completely lacks a PPT can replicate at a low level.