Dicoumarolは、Superoxide依存性メカニズムを介してHL-60細胞の血清離脱誘発G0/1遮断を緩和します

この研究は、ジクマロールがヒト骨髄性白血病HL-60細胞の細胞周期にどのように影響するかを研究するために設定されました。細胞は、血清剥離後にG0/1に蓄積されました。しかし、細胞を血清を含まない培地で5マイクロムジカウマロールで処理した場合、S期の細胞数の大幅な増加が観察されました。G0/1遮断の阻害は、チミジンの取り込み、網膜芽細胞腫タンパク質のリン酸化、および血清の非存在下での長期治療における細胞増殖の促進によって確認されました。ジクマロール治療はスーパーオキシドレベルを増加させましたが、過酸化物には影響しませんでした。細胞透過性のSODとSOD模倣体2-アミノ-3,5-ジブロモ-N- [トランス-4-ヒドロキシカクロヘキシル]でこの活性種を除去するため、G0/1遮断の阻害には細胞スーパーオキシドの増加が不可欠でした。ベンジルアミン（アンブロキソール、100ミクロム）および銅[II]ジイソプロピルサリチル酸（カディ、10ミクロム）は、ジクマロールの効果を完全に廃止しました。ただし、N-アセチル - システイン、Bcl-2の過剰発現、またはカタラーゼの細胞透過性型は効果的ではありませんでした。5-メトキシ-1,2-ジメチル-3- [（4-ニトロフェノール）メチル] - インドール-4,7-ジオン（ES936）、NAD（P）Hのメカニズムベースの不可逆的阻害剤：キノンオキシドレダクターゼ1（NQO1（NQO1））、S相侵入を促進せず、diCoumarolはES936の存在下でG0/1遮断を依然として阻害しました。ジクマロールは、スーパーオキシドを含むメカニズムを介してHL-60細胞のG0/1の正常な遮断を阻害することを実証しますが、この効果はNQO1触媒活性の阻害にのみ依存していません。私たちの結果は、酸化還元酵素を含む細胞プロセスを解明するために、ジクマロールの使用に関する予防的なメッセージを送信します。

This work was set to study how dicoumarol affects the cell cycle in human myeloid leukemia HL-60 cells. Cells were accumulated in G0/1 after serum deprivation. However, when cells were treated with 5 microM dicoumarol in serum-free medium, a significant increment in the number of cells in S-phase was observed. Inhibition of G0/1 blockade was confirmed by the increase of thymidine incorporation, the phosphorylation of retinoblastoma protein, and the promotion of cell growth in long-term treatments in the absence of serum. Dicoumarol treatment increased superoxide levels, but did not affect peroxide. Increase of cellular superoxide was essential for inhibition of G0/1 blockade, since scavenging this reactive species with a cell-permeable form of SOD and the SOD mimetics 2-amino-3,5-dibromo-N-[trans-4-hydroxycyclohexyl]benzylamine (ambroxol, 100 microM) and copper[II]diisopropyl salicylate (CuDIPS, 10 microM) completely abolished the effect of dicoumarol. However, N-acetyl-cysteine, overexpression of Bcl-2 or a cell-permeable form of catalase were not effective. 5-Methoxy-1,2-dimethyl-3-[(4-nitrophenol)methyl]-indole-4,7-dione (ES936), a mechanism-based irreversible inhibitor of NAD(P)H:quinone oxidoreductase 1 (NQO1), did not promote S phase entry, and dicoumarol still inhibited G0/1 blockade in the presence of ES936. We demonstrate that dicoumarol inhibits the normal blockade in G0/1 in HL-60 cells through a mechanism involving superoxide, but this effect is not dependent solely on the inhibition of the NQO1 catalytic activity. Our results send a precautionary message about use of dicoumarol to elucidate cellular processes involving oxidoreductases.