スルフォロダミンBアッセイと化学感受性

スルフォダミンB（SRB）アッセイは、Skehanと同僚によって開発され、大規模な薬物スクリーニング用途向けの薬物誘発性細胞毒性と細胞増殖を測定しました。その原理は、トリクロロ酢酸固定細胞のタンパク質塩基性アミノ酸残基に静電的に依存し、pHに結合するタンパク質色素スルフォダミンBの能力に基づいています。軽度の酸性条件下では、軽度の塩基性条件に結合し、細胞から抽出し、測定のために可溶化することができます。SRBアッセイの結果は、コンフルエンスの1〜200％の範囲の細胞密度で測定された細胞数と細胞タンパク質で線形でした。その感度は、いくつかの蛍光アッセイの感度と同等であり、ローリーやブラッドフォードの感度よりも優れています。信号対雑音比は好ましく、解像度は1000-2000セル/ウェルです。MTTやクローン原性アッセイなどの他の細胞毒性アッセイと同様に実行されました。SRBアッセイは比色測定のエンドポイントを備えており、非破壊的で無期限に安定しています。これらの実用的な進歩により、SRBアッセイは、大規模な用途でも薬物誘発性の細胞毒性を測定するための適切かつ敏感なアッセイになります。

The sulforhodamine B (SRB) assay was developed by Skehan and colleagues to measure drug-induced cytotoxicity and cell proliferation for large-scale drug-screening applications. Its principle is based on the ability of the protein dye sulforhodamine B to bind electrostatically and pH dependent on protein basic amino acid residues of trichloroacetic acid-fixed cells. Under mild acidic conditions it binds to and under mild basic conditions it can be extracted from cells and solubilized for measurement. Results of the SRB assay were linear with cell number and cellular protein measured at cellular densities ranging from 1 to 200% of confluence. Its sensitivity is comparable with that of several fluorescence assays and superior to that of Lowry or Bradford. The signal-to-noise ratio is favorable and the resolution is 1000-2000 cells/well. It performed similarly compared to other cytotoxicity assays such as MTT or clonogenic assay. The SRB assay possesses a colorimetric end point and is nondestructive and indefinitely stable. These practical advances make the SRB assay an appropriate and sensitive assay to measure drug-induced cytotoxicity even at large-scale application.