ビューレット反応におけるアミノ酸および他の化合物の交差反応性：尿ペプチド測定との干渉

背景：総タンパク質測定のためのビューレットアッセイは、2つを超えるすべてのペプチドと反応すると考えられています。尿のビューレットアッセイを使用したいくつかの研究では、小さなペプチドは一般に尿中のタンパク質よりも豊富であることが示唆されていますが、これがアッセイ特異性の問題であるかどうかは明らかではありません。 方法：アミノ酸、有機化合物、ペプチド、タンパク質、および超伸長尿標本の溶液に対するビューレット反応の特異性と速度論を分析し、結果をタンパク質測定の標準的な臨床アッセイと比較しました。 結果：いくつかのアミノ酸、ジペプチド、および銅と5メンバーまたは6メンバーの環キレート化複合体を形成できる他の有機化合物と交差したビューレットアッセイ。アミノ酸およびジペプチドとの反応は、より大きなペプチドとタンパク質（紫）よりも高い吸光度の最大（青色）を持っていました。銅を持つ潜在的な4、7-、8-、または9メンバーのリング複合体を形成する化合物は、反応性が低かった。アミノ酸アミド、ジペプチド、および長いペプチドは、プロリンを含むものを除き、実質的な反応性を持っていました。タンパク質とポリペプチドは、ペプチド結合ごとに同様のビューレット反応性を示しましたが、反応速度はペプチドよりもタンパク質の方が遅かった。3-kDaカットオフ膜を介してウルトラフィルターされた尿標本には、実質的なビューレット反応性がありましたが、吸光度の最大値はペプチドではなく交差反応性アミノ酸と一致していました。 結論：アミノ酸、アミノ酸誘導体、およびジペプチドを含む多くの化合物は、ビューレットアッセイの交差反応です。私たちの研究は、臨床研究所で広く使用されているエンドポイントと運動のビューレットアッセイの特異性の理解を改善します。アミノ酸、尿素、およびクレアチニンは、ビュレットアッセイによる尿ペプチド含有量の過大評価に寄与します。

BACKGROUND: Biuret assays for total protein measurement are considered to react with all peptides longer than 2 residues. Some studies using biuret assays of urine suggest that small peptides generally are more abundant than proteins in urine, but it is not clear whether this is a problem of assay specificity. METHODS: We analyzed the specificity and kinetics of a biuret reaction for solutions of amino acids, organic compounds, peptides, proteins, and ultrafiltered urine specimens and compared the results with standard clinical assays for protein measurement. RESULTS: The biuret assay cross-reacted with several amino acids, dipeptides, and other organic compounds able to form 5- or 6-member ring chelation complexes with copper. Reactions with amino acids and dipeptides had higher absorbance maxima (blue color) than with larger peptides and proteins (purple). Compounds forming potential 4-, 7-, 8-, or 9-member ring complexes with copper had low reactivity. Amino acid amides, dipeptides, and longer peptides had substantial reactivity, except those containing proline. Proteins and polypeptides had similar biuret reactivities per peptide bond, but reaction kinetics were slower for proteins than peptides. Urine specimens ultrafiltered through 3-kDa-cutoff membranes had substantial biuret reactivity, but absorbance maxima were consistent with cross-reactive amino acids rather than peptides. CONCLUSIONS: Many compounds, including amino acids, amino acid derivatives, and dipeptides, cross-react in biuret assays. Our studies improve understanding of the specificity of endpoint and kinetic biuret assays widely used in clinical laboratories. Amino acids, urea, and creatinine contribute to overestimation of urinary peptide content by biuret assays.